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[目 的]胃癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,近些年发病率居高不下,是我国恶性肿瘤导致死亡的第三大原因,在全球范围内甚至排在第二。由于多数患者在确诊时已处于中晚期,错过了手术治疗的最佳时机,且胃癌对各种治疗手段均具有一定抵抗性,导致其五年生存率较低。因其较高的发病率及死亡率严重威胁人类健康,而传统的治疗方法均具有局限性,迫切需要开发新的治疗方法。间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一种来源较为广泛,具有多向分化潜能的多能干细胞,是近些年临床及科研研究的热门领域。MSCs因其具有抗凋亡、免疫调节、抗炎、促血管生成的生物学功能,已被证实为治疗包括心血管疾病,糖尿病,阿尔茨海默病,多发性硬化症等多种疾病的潜在方法。同时,由于MSC对肿瘤有较好的亲和力,可以与肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)相互作用从而参与调节肿瘤的发展进程,因此近年来关于MSC与肿瘤的研究越来越多,尤其是利用人源间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)干预肿瘤细胞的发展。有研究表明,MSC可以促进肿瘤细胞的增殖及转移,但也有相反的研究报道。因此,本研究将探究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)与人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)在体内及体外对胃腺癌细胞 BGC-823与HGC27增殖及转移的影响,以探讨MSC在胃癌治疗中的可能性。[方 法]1.复苏实验所需细胞UCMSC、AMSC、BGC-823、HGC27并培养。2.hUCMSC与hAMSC表型分析、诱导分化及条件培养上清的收集2.1流式细胞术分析hUCMSC与hAMSC免疫表型2.2检测hUCMSC与hAMSC多向分化潜能2.3在经过细胞换液及传代处理后取生长状态良好的第三代细胞开始后续实验,并收集脐带间充质干细胞条件培养基(conditioned medium-umbilical cord mesenchymal stem cells,cm-UCMSC)与羊膜间充质干细胞条件培养基(conditioned medium-amniotic mesenchymal stem cells,cm-AMSC)。3.细胞增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK8)3.1取第3代BGC-823、HGC27两种胃腺癌细胞进行CCK8实验,分别用cm-USMSC及cm-AMSC培养两种胃癌细胞后,酶标仪测得450nm处的OD值,测得cm-USMSC及cm-AMSC对BGC-823与HGC27增殖的影响。4.细胞划痕实验.4.1细胞划痕实验分别检测cm-UCMSC与cm-AMSC在体外对BGC-823及HGC27迁移能力(migration)的影响。5.肿瘤细胞侵袭实验.5.1肿瘤细胞侵袭实验(Matrigel invasion assay)分别检测cm-UCMSC与cm-AMSC在体外对BGC-823及HGC27侵袭能力(invasion)的影响。6.裸鼠体内MSC影响肿瘤细胞转移活性实验.7.蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)验证MSC促进胃癌细胞BGC-823与HGC27增殖信号通路。[结果]1.CCK8检测发现BGC-823与HGC27两种细胞分别在不同浓度的cm-UCMSC及cm-AMSC刺激后,较高浓度的cm-UCMSC及cm-AMSC可以促进BGC-823与HGC27的增殖。2.细胞划痕实验结果显示cm-UCMSC对BGC-823的水平迁移无明显影响,而cm-AMSC抑制了 BGC-823的水平迁移;但cm-UCMSC及cm-AMSC均可以促进HGC27的水平迁移。3.肿瘤细胞侵袭实验结果显示cm-UCMSC对BGC-823的侵袭无明显影响,而cm-AMSC对BGC-823的侵袭有抑制作用;cm-UCMSC及cm-AMSC均可以促进HGC27的侵袭。4.在裸鼠体内,UCMSC及AMSC对BGC-823的转移无明显影响。5.蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)显示BGC-823与HGC27经过100%浓度cm-UCMSC及cm-AMSC培养后,pERK/ERK较对照组比例升高。[结 论]一、UCMSC与AMSC在较高浓度时对两种不同的胃癌细胞BGC-823及HGC27的增殖均有促进作用二、UCMSC在体外对胃癌细胞BGC-823迁移与侵袭无明显影响,AMSC在体外对胃癌细胞BGC-823迁移与侵袭有抑制作用;而UCMSC与AMSC在体外对HGC27细胞迁移与侵袭均有明显的促进作用。三、UCMSC与AMSC在裸鼠体内对BGC823细胞的转移无明显影响。四、UCMSC与AMSC是通过激活ERK通路促进了 BGC-823及HGC27的增殖。五、根据我们目前的研究结果,UCMSC和AMSC在胃癌治疗中的安全性需要进一步慎重考虑。