目的：免疫组化是现在较多地应用于研究与临床工作的一种标记免疫技术，具有操作简便、结果易于观察等优点。但是，在免疫组化的实际应用中由于种种因素的影响重复性并不好，染色结果并不尽如人意。为了使免疫组化的结果稳定，科研人员从标本固定、抗原修复、底物浓度、显色控制等各个环节都作了大量的实验寻找原因并予以改善。本实验目的是观察不同公司第二抗体是否是免疫组化染色的影响因素，进而比较了由不同亚类小鼠IgG制备的第二抗体的免疫组化染色结果，从而总结出一种制备质量稳定的第二抗体的方法。方法：10例乳癌组织常规做石蜡切片。每例标本用IgG1、IgG2b两种亚类单克隆抗体和三个公司的第二抗体同时用S-P法进行免疫组化染色。除第二抗体外，其他试剂均用Zymed公司S-P试剂盒的产品。随机取图像用图像分析系统进行分析，划肿瘤细胞300个，测量指标为细胞平均光度。阳性细胞的判定标准为细胞平均光度大于该标本阴性对照的细胞平均光度的均值加两倍标准差（+2s）。阳性标本用阳性强度和阳性率来表示染色强度。阳性强度为该标本所测量的阳性细胞的细胞平均光度的均值；阳性率为该标本所测量的肿瘤细胞中阳性细胞所占的比例。镜下观察，阳性细胞为胞浆着色。自制小鼠单克隆抗体，以小鼠IgG1、IgG2b两种亚类的单抗分别免疫家兔制备第二抗体（分别为一号二抗<WP=4>和二号二抗）。第二抗体经纯化、标记后与Zymed公司第二抗体以上述方法做免疫组化染色，图像分析系统分析结果。结果： 1.不同公司第二抗体染色强度比较 Zymed公司第二抗体在单抗亚类为IgG1和IgG2b时，阳性强度均最高，且与其他两个公司第二抗体差异有统计学意义（P<0.05）;阳性率比较，单抗为IgG1时，华美公司第二抗体阳性率最高，与博士德公司第二抗体差异有统计学意义（P<0.05）,单抗为IgG2b时，各公司第二抗体间阳性率差异没有统计学意义（P>0.05）。2.不同公司第二抗体对不同亚类单抗染色比较 相同组织标本，相同第二抗体，不同亚类两种单抗免疫组化染色的阳性强度间及阳性率间比值（IgG1:IgG2b）比较。阳性强度比，Zymed公司第二抗体与博士德公司第二抗体差异有统计学意义（P<0.05）; 阳性率比，各公司第二抗体间差异没有统计学意义（P>.05）。3.自制第二抗体与Zymed公司第二抗体染色强度比较 阳性强度比较，单抗为IgG1时，Zymed公司第二抗体强度最高，与二号二抗差异有统计学意义（P<0.01）; 单抗为IgG2b时，Zymed公司第二抗体强度最高，与一号二抗差异有统计学意义（P<0.01）。阳性率比较，单抗为IgG1时，Zymed公司第二抗体阳性率高，与二号二抗差异有统计学意义（P<0.01）; 单抗为IgG2b时，Zymed公司第二抗体阳性率高，与一号二抗差异有统计学意义（P<0.01）。4.自制第二抗体与Zymed公司第二抗体对不同亚类单抗（IgG1:IgG2b）染色比较 阳性强度比，阳性率比，Zymed公司第二抗体与两种自制二抗差异均有统计学意义<WP=5>（P<0.01）。结论：1. 不同公司第二抗体免疫组化阳性结果存在差异，说明不同公司生产的第二抗体是影响免疫组化染色的因素。第二抗体的浓度、亲和性、特异性的不同均可造成不同公司第二抗体质量的差别。2. 为了排除试剂浓度的影响，我们选取了两种亚类的单克隆抗体作实验。对于同一标本，不同亚类单克隆抗体免疫组化染色的阳性强度间及阳性率间的比值，不同公司第二抗体的差异有统计学意义。说明染色差异不仅仅是浓度差异造成的。3. 抗小鼠IgG的第二抗体可以分为两大部分，针对小鼠IgG种特异性抗原决定簇的抗体和针对小鼠IgG亚类（型）特异性抗原决定簇的抗体。两者及后者各组分的比例和亲和性会直接影响第二抗体的质量。现在的第二抗体制备方法多是由血清IgG作为免疫原，而血清IgG是多种亚类（型）IgG的混合物且组分间比例不稳定，制备出来的第二抗体质量就会不稳定。4. 我们由IgG1、IgG2b作为免疫原分别制备了第二抗体做免疫组化染色并与Zymed公司第二抗体染色比较，染色结果有显著差异。这说明第二抗体内针对小鼠IgG亚类（型）特异性抗原决定簇的抗体确实会影响第二抗体的质量。可以由各种亚类（型）的单克隆抗体分别制备相应的第二抗体并混合，提高第二抗体的质量。