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人口过多和增长过快对国家的经济建设造成了巨大的威胁,自20世纪70年代我国开始实施计划生育政策以来,有效的控制了人口的过度膨胀。如何安全、有效的控制人口增长,研制新型节育药物和方法一直是生物医药领域研究的热点和重点之一。 《本草纲目》中记载棕榈加工成碳具有收涩、止血之功效,棕榈笋及子花有治疗崩中带下的功效。《履巉岩本草》记载棕榈食之破妇人血气,不作胎孕。本文通过对棕榈花蕾(Palm Buds,PB)水提物的实验研究,探讨其抗生育作用及其机制,为中医药抗生育提供科学依据。 目的:探讨棕榈花蕾水提物(Aqueous Extract of Palm Buds,AEPB)对实验动物的抗生育作用及其可能作用机制。 方法: 1、AEPB抗生育作用的实验方法 1.1、AEPB的抗着床、抗早孕作用 小鼠以雌雄2:1合笼,每天早晨检查阴道,以阴栓出现日为妊娠第一天。将妊娠小鼠随机分为5组,即棕榈花蕾生药低、中、高不同剂量组(2.5g、5g、10g/kg);米非司酮组;NS组。抗着床实验在妊娠第1-4天,抗早孕实验在妊娠第6-9天,各组分别给予不同浓度的AEPB0.1ml/10gig,米非司酮10mg/kgih,NS0.1ml/10gig,1次/d。于妊娠第12天将小鼠颈椎脱臼处死、解剖,观察子宫中的胚胎数;取出卵巢、肾上腺、脾脏、胸腺,称重并计算其脏器指数。1.2AEPB的避孕作用。 将小鼠随机分为5组,即棕榈花蕾生药低、中、高不同剂量组(2.5g、5g、10g/kg);米非司酮组;NS组。各组分别给予不同浓度的AEPB0.1ml/10gig,米非司酮10mg/kgih,NS0.1ml/10gig,1次/d,连续3天。将5组小白鼠分别与雄鼠以2:1比例合笼1周,合笼期间每天检查阴道,交配成功者分别取出分笼饲养、分笼后12天颈椎脱臼处死小白鼠,观察子宫中有无胚胎。 2、AEPB的抗生育作用机制 2.1、AEPB对动物子宫平滑肌的影响 利用BL-420E生物机能实验系统,观察测量AEPB对大鼠离体子宫平滑肌的收缩频率、收缩幅度和活动力的影响。通过浴管内直接给药和十二指肠给药两种方法,观察并测量AEPB对动物在体子宫平滑肌的收缩频率、幅度、张力和活动力的影响。 2.2、AEPB对家兔排卵的影响 选取健康成熟未孕雌兔随机分成5组,即棕榈花蕾生药低、中、高不同剂量组(2.5g、5g、10g/kg);米非司酮组;NS组。各组分别给予不同浓度的AEPB0.1ml/10gig,米非司酮10mg/kgih,NS0.1ml/10gig,1次/d,连续3天。同时,在实验第1天,给家兔苯甲酸雌二醇(EB)5ug/kgih,1次/d,连续2天,第3天注射l％硫酸铜溶液0.4ml/kg,诱发排卵。注射后24小时解剖,检查两侧卵巢,记录排卵点。 2.3、AEPB对小鼠体内激素水平的影响 2.3.1、AEPB抗雌激素活性研究 选取体重10g-12g的昆明种雌性小鼠,随机分为6组,对照组(NS0.4ml/只ig);AEPB组(0.2ml/只和0.4ml/只ig);EB组(1ug/只,ih);EB+AEPB组(1ug/只+0.2ml/只和1ug/只+0.4ml/只),1次/d,连续3天。在第一次给药72h后,用分析天平称取子宫湿重,利用小鼠子宫重量法,计算并比较给药后各组间小鼠子宫重量的差别。 2.3.2、酶联免疫吸附试验(ELISA)测定AEPB对小鼠雌孕激素水平的影响 成年雌性未孕小鼠分别灌胃5g/kg、10g/kg、20g/kg的AEPB,1次/d,两周后用ELISA法测定血清中雌、孕激素水平。 2.3.3、电化学发光全自动免疫分析仪(Elecsys2010)测定AEPB对家兔体内激素水平的影响 给健康雌性未孕家兔腹腔注射不同剂量的棕榈花蕾水提物,1次/d,连续9天。给药后分别从耳动脉取血,用Elecsys2010仪器测定血清中FT3、FT4、雌二醇、孕酮的含量。 3、AEPB的急性毒性实验 将小鼠随机分为对照组和给药组,每组20只。根据最大耐受剂量测定急性毒性实验法:给药组给予浓度为1g/ml的AEPB0.4ml/10gig,2次/d,对照组给予等量的NS,连续7d,密切观察其一般行为、饮食量和饮水量、出现中毒症状及死亡情况,隔日称一次体重。若有动物死亡,应做尸检。 结果: 1、AEPB的抗生育作用 低、中、高剂量AEPB使小鼠着床抑制率达60%、90%、100%,对早期妊娠小鼠致流产率分别为25%、66.7%、77.8%,中、高剂量AEPB使小鼠宫腔内无胚胎发育,避孕率达100%。 2、AEPB的抗生育作用机制 AEPB使大鼠离体子宫平滑肌的收缩频率增快、收缩张力提高,并能使动物在体子宫平滑肌的收缩幅度增强;AEPB中、高剂量组对家兔的排卵抑制率分别达46%、100%;ELISA法发现AEPB可致小鼠体内孕酮水平显著升高;Elecsys2010仪测得AEPB能显著性降低血中FT3含量、升高孕酮水平。 3、AEPB的急性毒性实验 连续给药后观察7日,给药组与对照组均活动正常,无动物死亡,7日后处死动物,尸检肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器未见病理改变。 结论: AEPB具有抗着床、抗早孕和避孕作用;其抗生育作用机制与兴奋子宫、抑制排卵、降低家兔血中FT3和升高孕酮水平有关。急性毒性实验显示其无明显毒性。