联合TLR2mab和TLR4mab对同种心脏移植免疫排斥反应的影响

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目的:在大鼠同种心脏腹腔异位移植模型中,使用TLR2单克隆抗体(Tolllike receptor2monoclonal antibodies,TLR2mab)联合TLR4单克隆抗体(Tolllike receptor4monoclonal antibodies,TLR4mab)预处理受体大鼠,研究TLR2mab联合TLR4mab对受体自身免疫调节以及其对同种异体移植免疫排斥反应的影响,探索其诱导受体大鼠产生免疫耐受的可能,进而揭示其部分机理。方法:将供体Wistar大鼠及受体SD大鼠随机分成四组, A组(空白组):仅行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植;B组(TLR2mab组):术前一天受体SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR2mab,行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后以每两天100ug/kg腹腔注射维持;C组(TLR4mab组):术前一天受体SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR4mab,行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后以每两天100ug/kg腹腔注射维持;D组(TLR2mab联合TLR4mab处理组):术前一天受体SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR2mab和TLR4mab,行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后以每两天100ug/kg腹腔注射维持。观测指标:移植心脏的存活时间、病理改变;移植术后第7天抽取受体SD大鼠外周血,流式细胞仪检测各组受体外周血中CD4+CD25+Treg细胞比例及Foxp3蛋白表达检测结果;ELISA法检测移植后受体外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-2、IL-10、TGF-β1变化,以及半定量PCR和荧光定量real-time PCR检测外周血单个核细胞中NF-κB、MYD88、IRF1的mRNA表达情况。结果:(1)供心平均存活时间(MST):A组:7.8±0.84天,B组:25.8±2.48天,C组:24.8±2.15天,D组32.6±3.26天。D组供心平均存活时间较A、B、C组明显延长,P<0.05;且B、C组与A组比较,P<0.05。(2)受体外周血CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3蛋白表达检测结果: A组:2.5±0.47%,42.68±5.47%;B:7.98±1.33%,63.12±5.14%;C:8.98±1.48%,67.54±4.37%;D:19.08±1.46%,82.02±4.61%。D组中CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3蛋白表达均明显高于A、B、C组,P<0.05,有统计学差异;B、C组与A组比较,P<0.05,有统计学差异。(3)外周血TNF-α(pg/ml):A组:538.59±13.7;B组:271.19±44.07;C组:268.77±29.06;D组:157.18±26.77。D组TNF-α表达量较A、B、C三组明显降低, P<0.05;B、C组与A组相比,P<0.05,有统计学意义。(4)外周血IFN-γ(pg/ml):A组:527.67±62.13;B组:176.83±17.35;C组:154.25±18.44;D组:104.99±14.39。D组IFN-γ表达量较A、B、C三组明显降低, P<0.05;B、C组与A组相比,P<0.05,有统计学意义。(5)外周IL-6(pg/ml):A:302.21±20.76;B:113.59±15.07;C:100.07±13.98;D:64.75±11.21。D组IL-6表达量较A、B、C三组明显降低, P<0.05;B、C组与A组相比,P<0.05,有统计学意义。(6)外周血IL-2(pg/ml):A组:5.87±0.22;B组:2.94±0.13;C组:3.6±0.14;D组:2.11±0.14;D组IL-2表达量较A、B、C组明显降低,P<0.05;B、C组与A组相比,P<0.05,有统计学差异。(7)外周血IL-10(pg/ml):A组:23.91±3.51;B组43.46±4.25;C组35.75±5.68; D组63.31±4.53。D组IL-10表达量较A、B、C组增加,P<0.05;B、C组与A组相比, P<0.05,有统计学差异。(8)外周血TGF-β1(pg/ml):A组:120.74±7.05;B组:164.91±14.25;C组:169.6±10.38;D组:201.36±12.36。D组TGF-β1表达量较A、B、C组明显升高,P<0.05;B、C组与A组相比,P<0.05,有统计学差异。(9)受体外周血单核细胞中NF-κB、MYD88、IRF1的mRNA表达情况。D组单核细胞中NF-κB、MYD88、IRF1的mRNA表达情况与A、B、C组相比,明显降低,P<0.05,有统计学差异。结论:(1)应用TLR2mab和TLR4mab可以通过阻断TLR2/4--Myd88--NF-kB和TLR2/4-Myd88-IFR1路径,减轻移植后急性排斥反应。(2)在大鼠同种异体异位腹腔心脏移植模型中我们可以观察到,TLR2mab和TLR4mab联合预处理受体大鼠,与单用TLR2mab或TLR4mab预处理受体大鼠相比,可明显延长心脏移植物的存活时间,更好的减轻急性血管性排斥反应(AVR)的发生,但不能完全克服其发生。
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