禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)引起的一种高度接触性传染病,1878年首次发生于意大利,现已几乎遍布全世界。尤其是近年暴发的H5N1亚型高致病性禽流感不仅引起禽类的大面积发病、死亡,更是对人类的健康构成了威胁。流感病毒的病毒颗粒表面有血凝素(Hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase, NA)两种糖蛋白。与高度变异的HA基因相比,NA基因的变异程度要小。NA基因编码的NA蛋白是AIV的主要表面抗原之一,又是体液免疫的靶抗原,可诱导机体产生特异性抗体,抑制病毒从感染细胞中释放,再感染其他细胞,从而减少病毒的增殖。本试验在Sf9昆虫细胞中表达H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶NA基因。即通过用PCR方法成功克隆出H5N1亚型流感病毒神经氨酸酶NAs基因(不含信号肽列),定点插入到杆状病毒转移载体pFastBacHTb中,获得重组转移载体pFastBacHTb-NAs。将其转化到含有AcBacmid和helper质粒的E.coli DH10B感受态细胞中与AcBacmid重组,获得的重组子称之为rAcBacmid-NAs。继而把获得的重组子转染对数生长期的昆虫Sf9细胞当中,获得的重组杆状病毒称之为vAc-NAs。将用vAc-NAs重新感染处于对数生长期的昆虫Sf9细胞,培养至3d~5d后收集被感染的细胞。分别用SDS-PAGE和Western-blotting方法进行了分析。分析结果证实NAs基因有效表达在昆虫Sf9细胞当中,并且分子量约为52kDa,与预算的理论值相符合,但是在细胞上清液中未检测出相应的表达产物。本试验通过对1株猪原高致病性AIV毒株NA基因片段进行克隆,构建了能够表达H5N1亚型NA基因的重组杆状病毒载体,并将其在昆虫细胞中进行了表达,以期待为进一步解析NA蛋白的生物学功能,以及研制新型流感疫苗工作奠定了基础。