用mRNA差异显示方法初步分离小鼠乳癌MA891细胞转移相关基因

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chlo16105
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肿瘤转移是导致肿瘤病人死亡的最重要的原因,因而一直是肿瘤研究的热点。在过去的研究中人们已经发现许多因素与肿瘤转移相关,如粘附分子转移相关基因,侵袭酶及其拮抗剂及肿瘤血管生成等。这么多因子与肿瘤转移相关,说明人们还未发现影响肿瘤的关键因子或者对不同的肿瘤细胞有不同转移相关分子起作用。目前仍有许多实验室从事肿瘤转移相关因子的分离工作。 本实验室在过去的研究中发现IFNγ可增强MA891肿瘤细胞系(一种来源于TA2小鼠自发性乳腺癌,具有高度肺转移性的细胞系)肺转移,而IFNα则抑制其转移。这说明IFNγ与IFNα处理的MA891细胞存在着与肿瘤转移相关基因的改变。因此我们用mRNA差异显示技术(mRNAdifferential display)对两种不同处理的MA891细胞的mRNA进行比较,以期分离与肿瘤转移相关系基因。 我们分别用200u/ml重组人IFNα及IFNγ处理MA891细胞48小时后,提取总RNA,用所有T12MA/C/G/T与20种AP引物(arbitrary primer)配对,每个RNA样本进行4×20次逆转录PCR反应,理论上可覆盖95%以上的mRNA。为排除一些假阳性,每个逆转录PCR反应都重复一次。我们共分离12个差异带,依据引物对及RNA来源命名为T2α、T2γ、C4α、T5α1、T5α2、T6α、T11γ、G15γ、T15α、T15γ、T16γ、T17α。其中T15α、T15γ未能再扩增,我们对其余的10个片段进行了克隆及
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