论文部分内容阅读
山羊精液保存技术使得人工授精不再受地域和种公畜的限制,有利于品种的育成和改良。精液保存的方法分为冷冻保存和液态保存,冷冻保存能够实现精液的长期保存,但山羊冻精受胎率一直很低(<50%);而液态保存的精子活力下降较快,严重阻碍了人工授精技术的大范围实施与推广。因此,提高山羊精液保存质量成为加速奶山羊良种扩繁的关键技术。本试验旨在研究西农萨能羊精液低温及冷冻保存、同期发情和人工授精等扩繁技术。选取6只1.5-4周岁、繁殖性能良好、健康的西农萨能羊种公羊,利用假阴道法连续采集其新鲜精液并利用计算机软件(CASA)进行精液品质评定,分析不同季节精液品质差异;研究温度、卵黄及半量换液对种公羊精液液态保存效果的影响;研究渗透性抗冻保护剂、多糖对精子冷冻保护效果的影响,优化冷冻精液稀释液配方;选择220只健康、同质性好的西农萨能奶山羊母羊,按胎次均分为三组,在繁殖季节初期实施不同的同期发情处理方案,鲜精子宫颈口人工授精,统计不同处理及不同胎次间发情率、妊娠率和产羔率,并检测撤栓前,发情当时和配种后21d血浆中雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)和促黄体素(LH)浓度。结果表明:1.春夏秋冬季奶山羊鲜精活率分别为78.8±2.91%、82.2±1.93%、83.8±1.64%和70.5±3.15%,四个季节中,秋季精液品质最好,冬季最差,差异显著(P<0.05),其他季节精液品质较秋季有所下降,但与秋季差异不显著(P>0.05)。2.以Tris-葡萄糖为基础稀释液,4℃保存环境,无卵黄包被条件下精液保存至第4天活率下降至38.3%,卵黄包被下保存至第8天,活率仍可达到35.4%;4℃环境,半量换液有利于精液保存,保存精液至第12天,精子活率仍可达到30%以上。3.以Tris-卵黄为基础稀释Ⅰ液,在冷冻保存Ⅱ液中添加不同浓度的渗透性抗冻剂甘油(6%)、乙二醇(3%,6%)、二甲基亚砜DMSO(3%,6%)、二甲基乙酰胺DMA(3%,6%),冷冻-解冻检测精子活率、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)浓度。结果表明,稀释液中添加乙二醇(3%,6%)和甘油(6%)都能明显提高山羊冷冻精液品质,3%乙二醇可以替代甘油作为山羊冷冻精液抗冻剂发挥更好的抗冷冻保护作用。4.以Tris-卵黄为基础稀释液,在冷冻稀释Ⅰ液和Ⅱ液中添加不同浓度的红景天多糖(0mg/L、4mg/L、8mg/L、12mg/L、16mg/L、20mg/L),结果表明:红景天多糖能明显(P<0.05)提高冷冻-解冻后精子活率、质膜完整率、线粒体活率和GSH浓度,降低MDA含量,只在冷冻稀释Ⅰ液中添加红景天多糖效果最好,适宜添加量为16mg/L。5.三个同期发情处理分别为处理1埋植孕酮阴道海绵栓(CIDR)14d,撤栓前一天每只羊肌肉注射300IU孕马血清促性腺激素(PMSG),处理2在处理1基础上,首次配种时每只羊肌肉注射促卵素排3号(LHRH-A3)5ug,处理3在处理1基础上,撤栓时每只羊肌肉注射促卵泡激素(FSH)50IU,其发情率分别为93.5%、95.5%、93.5%,其中处理1妊娠率32.81%,产羔率176.2%,效果最好。6.血浆中E2和FSH在撤栓前保持较低水平,发情当时迅速升高,配种后21d下降到撤栓前水平,相反,P和LH在撤栓前保持较高水平,发情当时迅速下降,配种后21d上升,但低于撤栓前水平;所测四种激素,妊娠羊与空怀羊在这三个时间点差异均不显著(P>0.05)。