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乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)是以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸为辅酶,分别催化醇和醛反应的酶类。在工业生产和医学应用上具有可观的研究价值。近年来由于有机相催化和膜反应器的研究发展对ADH应用起到的推动作用,以及乙醛脱氢酶在相关疾病检测方面的广泛应用,国内外学者对ADH和ALDH的关注度逐渐提升。ADH及ALDH普遍存在于动物体内和微生物中,目前国内外已有不少学者对微生物中ADH和ALDH的分离纯化进行了研究,但从动物肝脏和微生物中提取ALDH和ADH存在产量低、成本过于昂贵等问题。本文通过分子生物学手段,克隆获得乙醇脱氢酶基因及乙醛脱氢酶基因并实现高效表达,以期大量获得ADH和ALDH,主要研究结果如下：1.通过PCR方法成功获得酵母中adh2和aldh6基因,将目的基因与T载体连接后测序,经比对后确定与已公布序列相似性分别为96%和99%,序列结果上传Genbank后获得登录号JX901290、JX901291。2.利用大肠杆菌表达系统表达adh2,将目的基因插入到原核表达载体中,在37℃,IPTG终浓度为1mmol/L条件下进行诱导表达,酶活力为0.15U/mg。3.利用酿酒酵母表达系统分别表达adh2、aldh6基因,重组菌诱导4h后即达到最高酶活。重组菌I-ADH乙醇脱氢酶酶活力为0.49U/mg,最高酶活为原始菌株的2.7倍；重组菌I-ALDH乙醛脱氢酶酶活力为0.11U/mg,最高酶活为原始菌株的2倍。4.将adh2与aldh6基因偶联在同一表达载体pYES2上,构建表达载体pYES2-adh2-aldh6,从而实现两种酶在酿酒酵母INVsl中的共同表达。重组菌I-ADH-ALDH最高ADH酶活力为0.32U/mg,最高ALDH酶活力为0.082U/mg。5.从巴氏醋杆菌总DNA中获得一段编码乙醇脱氢酶的基因,经比对分析与Genbank上JF732899.1相似性达到98%。将该基因至于pET表达载体上经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳表明,存在特异性条带,且大小相符,重组菌在在28℃IPTG终浓度为1mmol/L条件下诱导6h,酶活力达到最高为0.42U/mg。