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鉴定已知蛋白的相互作用蛋白为探究其蛋白功能和分子机制提供重要依据。确定蛋白的相互作用的方法之一是免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP)后进行质谱(mass spectrometry,MS),这种方法可以确保从生理条件下的细胞或组织中分离、鉴定靶蛋白和其相互作用蛋白。本文主要先通过Co-IP与LC-MS联用检测TRIM3的相互作用蛋白,后对检测的结果分析、筛选,再通过分子生物学实验进一步验证质谱检测结果,且在宫颈癌和乳腺癌细胞中探究TRIM3的功能,与质谱结果对照。本课题研究的主要工作是:(1)通过Co-IP、LC-MS/MS联用检测HeLa细胞中能与TRIM3相互作用的蛋白,对这些蛋白的定位、功能和作用进行统计、分析,来更全面的探究在复杂的细胞内环境中,TRIM3是如何发挥其功能的。本文检测到了227个能与TRIM3相互作用的蛋白质,这些蛋白中有部分是p53信号通路的重要成员。(2)通过质谱筛选出p53信号通路后,进行Western Blot、免疫印迹等实验检测TRIM3与重要抑癌蛋白p53间的作用,结果显示TRIM3可以使p53蛋白水平下调。通过荧光素酶报告基因检测TRIM3对p53靶蛋白p21启动子活性的影响,结果显示在缺失p53时TRIM3不能影响p21的转录,而p53存在时TRIM3通过下调p53来抑制p21的转录。(3)探究TRIM3在宫颈癌细胞系和乳腺癌细胞系中的作用。实验方法如下:通过RT-PCR检查TRIM3在不同细胞系中mRNA水平的表达情况,结果显示中T-47D中TRIM3表达较多,HeLa中TRIM3表达较少;通过MTT和克隆形成实验检测TRIM3对细胞增殖能力的影响,结果显示TRIM3可以显著抑制宫颈癌细胞系和乳腺癌细胞系的增殖,而这不依赖于p53;通过划痕实验检测TRIM3对细胞迁移能力的影响,TRIM3不能影响细胞的迁移;通过流式细胞术检测TRIM3对细胞周期的影响,在有p53存在时TRIM3才能影响细胞周期进程。本研究质谱发现了TRIM3与p53信号通路间的联系,确定TRIM3可以影响p53的蛋白水平,进而影响肿瘤细胞周期的进程。本研究为宫颈癌的治疗、选择有效的药物靶点提供了理论依据。