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背景与目的:新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)是局部晚期宫颈鳞癌治疗非常重要的手段之一,宫颈鳞癌(squamous cervical cancer,SCC)细胞对NAC的敏感性是SCC治疗成败的关键因素。PI3K/Akt信号通路中基因多态性可能影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本研究以接受铂类药物为基础NAC的宫颈鳞癌患者为研究对象,通过分析比较PI3K/Akt通路中基因多态性及癌组织差异表达蛋白质与宫颈鳞癌NAC敏感性的关系,以期预测NAC疗效相关的PI3K/Akt通路中基因多态性位点及蛋白标志物。方法:1.选取FIGO(the Clinical International Federation of Gynecology and Obstetrics)临床分期为IB2-IIB接受以铂类药物为基础的NAC治疗至少两个疗程的SCC患者259例,化疗结束后15天,根据WHO实体瘤近期疗效评定标准判定患者化疗疗效,其中NAC有效组168例,NAC无效组91例。提取患者化疗前全血基因组DNA并利用高通量Sequenom MassARRAY SNP基因型技术检测PI3K/Akt信号通路中PIK3CA、Akt1、Akt2和PTEN基因中17个tagSNP的基因型,分析其等位基因和基因型的分布与NAC敏感性的关联。2.选取FIGO临床分期为IB-IIA接受顺铂联合紫杉醇化疗至少两个疗程的SCC患者10例,根据WHO实体瘤近期疗效评定标准,将患者分为NAC有效组和无效组,每组各5例。分别提取NAC有效组与NAC无效组中癌组织样本的总蛋白,双向凝胶电泳方法获得两组样本差异表达蛋白质图谱,使用ImageMaster 2D Platinum软件比较分析图谱中差异蛋白点,运用MALDI-TOF-MS质谱鉴定表达差异蛋白质。使用String在线软件分析预测差异蛋白质相互作用网络,并通过David在线软件对差异蛋白进行功能富集分析。选取ImageMaster 2D Platinum软件分析中差异表达倍数高的3个蛋白质,进行Western blot验证。结果:1.在局部晚期scc患者中,pik3ca基因rs3729679位点ag基因型携带者比aa基因型携带者化疗耐药风险明显增高(p=0.022)。rs12494623位点中携带tc基因型患者比cc基因型携带者容易发生nac耐药(p=0.018)。akt1基因中rs2498786位点cg基因型携带者比gg基因型携带者nac敏感性高(p=0.036)。akt2基因中的rs10416620和rs62107593位点g等位基因(p=0.037)及rs34716810位点a等位基因(p=0.037)可显著降低scc患者nac耐药风险。并且发现akt2基因中rs892120位点g等位基因与scc患者nac敏感性增高有潜在关联(p=0.045)。抑癌基因ptenrs17431184位点cc基因型携带者呈现降低nac耐药的趋势(p=0.061)。进一步根据铂类药物不同分层分析后发现,在以顺铂为基础的nac化疗方案中pik3ca基因rs3729679位点(p=0.010)和rs12494623位点(p=0.008)与scc患者nac低敏感具有显著相关性。单倍型分析发现,akt1基因中ggcc单倍型是scc患者化疗耐药的危险单倍型(p=0.018)。akt2基因中低频单倍型ggggag有保护作用,使scc患者发生耐药的风险降低(p=0.043)。2.获得了清晰、重复性好的nac有效组和nac无效组的双向凝胶电泳图谱。通过imagemaster2dplatinum软件比较分析,发现两组中显著差异表达蛋白点共有72个(差异倍数在1.5倍以上,p<0.05)。其中与nac有效组相比,nac无效组中有37个蛋白表达上调,35个蛋白表达下调。选取其中差异表达倍数较高且图像清晰的12个蛋白点进行质谱鉴定。在nac无效组中7种蛋白质tryptasebeta-2、stathmin1、annexina1、14-3-3σ、scaa2、hsp27和hsp70表达上调;5种蛋白质分别为guaninenucleotide-bindingproteinsubunitbeta-2-like1、albumin、poteankyrindomainfamilymembere、capg和pkm2蛋白表达下调。将这12个差异蛋白进行功能富集分析显示,这些蛋白主要参与蛋白质磷酸化、乙酰化修饰和细胞凋亡的功能调节。westernblot验证差异表达倍数显著的3个蛋白质,其表达差异情况与双向电泳检测结果一致:hsp70和stathmin1在nac无效组中表达高于nac有效组,而pkm2在nac无效组中低表达。结论:1.在局部晚期宫颈鳞癌患者中,pi3k/akt信号通路中pik3ca、akt1和akt2基因多态性与scc患者nac敏感性相关。rs3729679、rs12494623、rs2498786、rs10416620、rs62107593及rs34716810位点可成为预测宫颈鳞癌nac疗效的潜在分子指标。2.在顺铂为基础的nac疗效不同的局部晚期scc患者中,hsp70、stathmin1、guaninenucleotide-bindingproteinsubunitbeta-2-like1、pkm2和tryptasebeta-2可能通过蛋白磷酸化和乙酰化修饰与annexina1、hsp27及14-3-3σ共同作用参与抑制细胞凋亡,影响宫颈鳞癌细胞对顺铂为基础的NAC敏感性。差异表达较为显著的蛋白质Hsp70、PKM2和Stathmin1有可能成为临床预测SCC患者NAC疗效的蛋白标志物。