研究背景和目的：
　　减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009是一株具有肿瘤靶向性及抑制肿瘤作用的减毒突变株。研究表明VNP20009在抑制肿瘤生长过程中，肿瘤缺氧微环境的改变则不利于细菌的生存和繁殖，进而导致其抗肿瘤效果明显减弱。此外，人体免疫力和减毒沙门氏菌的相关毒性也限制了VNP20009的抗肿瘤临床应用。为了提高VNP20009在肿瘤组织中的定植以及增强其抗肿瘤作用。我们构建了真核表达的VNP20009-DNase Ⅰ工程菌株，并与雷公藤内酯醇（TPL）联合应用，旨在观察这种联合应用的抗肿瘤活性，并初步探讨其抗肿瘤的分子机制，从而为其临床应用提供科学依据。
　　实验方法：
　　1. 采用电转法将重组基因DNase Ⅰ质粒导入VNP20009中，然后通过DNA消化实验，检测其裂解DNA的活性能力；2. 采用MTT法检测VNP20009-DNase Ⅰ工程菌株、TPL及其联合应用对黑色素瘤细胞的增殖作用，细胞划痕实验检测对细胞迁移能力的抑制作用；3. Annexin V和PI双标流式检测其诱导细胞凋亡的能力；4. DAPI染色检测对细胞凋亡的影响；5. 建立小鼠黑色素瘤模型，并分别观察他们对肿瘤生长及小鼠生存的影响；6. 利用Western blot法检测小鼠肿瘤中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)和炎症相关蛋白（TLR-4、p-NF-κB、NF-κB、p-AKT、AKT）的表达；7. ELISA检测各组小鼠血清中IL-1β和TNF-α炎症因子的表达；8. q-PCR检测肿瘤组织中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的表达。
　　结果：
　　1. DNA消化实验显示VNP20009-DNase Ⅰ工程菌株上清能够将DNA彻底裂解；2. VNP20009-DNase Ⅰ工程菌株和TPL均可显著抑制B16F10细胞生长和细胞迁移；3. TPL可显著增强VNP20009-DNase Ⅰ工程菌株诱导B16F10细胞的凋亡率；4. TPL显著增加VNP20009-DNase Ⅰ的肿瘤定植率；4. VNP20009-DNase Ⅰ工程菌株与TPL联用显著抑制肿瘤生长，延长小鼠寿命，并扩大黑素瘤中的坏死区域；6. 联合治疗能上调Bax/Bcl-2和Caspase-3的表达，下调TLR4/NF-κB信号通路p-AKT/AKT蛋白的表达；7. TPL可下调VNP20009-DNase Ⅰ使用时产生的促炎因子表达量。
　　结论：
　　1. VNP20009-DNase Ⅰ能显著抑制小鼠黑色素瘤的生长、浸润和迁移，其抗肿瘤作用明显高于野生菌VNP20009；
　　2. TPL显著提高VNP20009-DNase I在肿瘤组织中的定植；
　　3. VNP20009-DNase Ⅰ与TPL联合应用的抗肿瘤效果明显强于单独用药，其机制可能与上调Bax/Bcl-2和Caspase-3的表达、抑制TLR4/NF-κB信号通路及下调VNP20009-DNase Ⅰ诱导的促炎因子表达有关。