目的:巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）是炎症相关疾病治疗的重要靶点。本课题通过计算机虚拟筛选手段,以MIF互变异构酶活性为评估方法,设计筛选酶抑制率更高、抗炎活性更强、细胞毒性更小的新型MIF小分子抑制剂,探究其对小胶质细胞激活和炎症因子释放的作用及机制,并在LPS诱导炎症相关的抑郁症模型中初步探讨候选化合物的抗抑郁活性,为神经炎症相关疾病药物发现提供基础。方法:利用分子对接打分等计算机虚拟筛选技术对ChemDiv数据库进行大规模虚拟筛选,挑选并购买可能与MIF活性位点结合的化合物进行MIF互变异构酶实验,以ISO-1为阳性对照,测定化合物的半数抑制浓度IC50,筛选出酶抑制率超过25%的化合物进行生物活性功能验证。在LPS诱导BV-2小胶质细胞系和小鼠大脑皮层原代小胶质细胞中,采用Griess试剂法测定炎症标志物NO的释放,MTT法检测细胞活力,实时荧光定量PCR法检测炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达,蛋白印迹法和酶联免疫吸附法检测炎症因子的蛋白表达,筛选出酶抑制率高、抗炎活性强、细胞毒性小的候选化合物进行下一步抗炎机理探究。通过siRNA干扰技术检测MIF敲除后候选化合物的抗炎活性,蛋白印迹法检测候选化合物对ERK-1/2蛋白磷酸化水平的影响,实时荧光定量PCR法检测候选化合物处理后小胶质细胞内M1 marker（CD32 和IL-1β）以及 M2 marker（CD206 和 Arginase 1）的 mRNA 水平。采用脂多糖LPS诱导炎症相关的抑郁症模型,以小鼠悬尾实验和强迫游泳实验初步评价候选化合物的抗抑郁活性。结果:从大于100万个多样性小分子中虚拟筛选出148个可能与MIF活性位点结合的化合物。在MIF互变异构酶活性实验中,12个化合物的酶抑制率超过25%,IC50值均小于ISO-1。其中5个候选化合物可显著抑制LPS诱导小胶质细胞NO释放,且细胞毒性较小,下调炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达,减少iNOS和COX-2的蛋白表达。化合物#2和#12抗炎活性最优,剂量依赖性抑制炎症因子的mRNA和蛋白表达,MIF敲除后抗炎活性消失。此外,化合物#2和#12可显著抑制LPS诱导小胶质细胞介导ERK-1/2蛋白磷酸化,下调小胶质细胞M1 marker（CD32 和 IL-1β）,上调 M2 marker（CD206 和 Arginase 1）的 mRNA 水平。动物实验结果显示,化合物#2显著减少LPS诱导的抑郁样行为小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间,抑制小鼠海马组织内COX-2和IL-1β的蛋白表达。结论:本课题结合计算机虚拟筛选和MIF酶活性实验,发现若干新型MIF小分子抑制剂,通过生物活性功能验证,筛选出抗炎活性最优的化合物#2和#12。化合物#2和#12有效抑制小胶质细胞活化以及改善LPS诱导炎症相关的小鼠抑郁样行为。以上结果表明,新发现的MIF小分子抑制剂可在神经炎症中发挥抗炎保护作用,值得进一步深入研究和开发。