GDF-9转基因小鼠模型的建立

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目的:通过建立转GDF-9基因的小鼠模型进一步揭示GDF-9基因的功能。方法:构建含Ase Ⅰ.AflⅡ和Stu Ⅰ三个酶酶切位点的pIRES2-GDF9-EGFP的转基因载体,然后通过原核注射法导入受精卵内,获得转基因胚胎。采用手术移植法将获得的转基因胚胎移植到ICR假孕母鼠输卵管内,获得转基因小鼠。应用PCR和Southern blot对获得的FO代小鼠进行外源基因整合情况鉴定,并将转基因阳性小鼠与阴性小鼠交配繁育后代。试验结果:质粒注射浓度的比较试验结果显示,空白注射组的胚胎存活率与0.5ng/μL、1ng/μL和2ng/μL这三个组的差异不显著,显著高于4ng/μL注射组(P<0.05)。DNA注射组中0.5ng/pL、1ng/μL和2ng/μL这三个浓度组间的分裂率和囊胚率差异不显著,但均显著低于空白注射组(P<0.05),4ng/μL组的分裂率和囊胚率极显著低于空白注射组(P<0.01)。4ng/μL注射组的囊胚阳性率为44.4%,显著高于2ng/μL组(34.1%)(P<0.05),极显著高于0.5ng/μL(18.6%)和1ng/μL组(17.1%)(P<0.01)。选择对胚胎毒性低且EGFP表达率较高的2ng/μL浓度进行原核注射,共注射607个受精卵,存活的受精卵有450个,存活率为74.1%。将450个存活的胚胎移植到16只假孕的ICR母鼠的输卵管内,16只母鼠全部怀孕,得到95只仔鼠,产仔率为21.1%。有3只仔鼠在出生2天后死亡。其余92只仔鼠经PCR检测有4只为转基因阳性小鼠,部分小鼠进行Southern blotting技术检测,结果有1只有特异性的杂交信号出现。对founder小鼠进行了扩繁,产生了F1代3窝,共生仔37只,转基因小鼠的窝产仔数平均为12.3只,产仔数较野生型有所提高,但不明显。结论:本研究建立的转GDF-9基因小鼠模型结果表明,GDF-9基因的过表达可能对动物繁殖性能有一定影响。
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