在卵巢癌基因治疗的实验研究中，酶解前体药物策略已得到广泛的应用。但是，该策略本身并不能实现对卵巢癌细胞的选择性，仍会产生较重的副作用。近年来，靶向转录已成为肿瘤基因治疗的研究热点，已有多项研究将靶向转录与酶解前体药物策略结合起来，并在一定程度上达到了肿瘤特异性杀伤效应。然而，这些用于靶向转录的启动子在其它多种组织都有着低水平的表达活性，因此限制了该方法的临床应用。 本研究试图构建一种在卵巢癌细胞中高效特异激活的启动子序列，用该启动子序列调控前体药物转换酶基因的转录。我们根据卵巢雌激素环境、肿瘤微环境特点以及端粒酶与肿瘤的关系，构建了雌激素反应元件（ERE）和缺氧反应元件（HRE）的串联重复序列，作为顺式作用元件对hTERT核心启动子进行双重修饰，以实现组织特异性和肿瘤特异性。为了进一步评价修饰后启动子的活性定位及对卵巢癌细胞的杀伤作用从而确定其临床应用价值，我们构建了由这些启动子引导酵母源性胞嘧啶脱氨酶FCY₁基因表达的重组复制缺陷型腺病毒。 一、修饰hTERT核心启动子： 分别构建雌激素反应元件（ERE）和缺氧反应元件（HRE）的串联重复序列，并将它们插入hTERT核心启动子序列上游，得到卵巢癌特异性启动子序列。 二、穿梭质粒的构建： 将该启动子序列与酵母源性胞嘧啶脱氨酶（FCY₁）基因插入穿梭质粒。 第四不巨大学硕士学位论文一 三、重组腺病毒的构建： 用穿梭质粒与辅助质粒共转染HEK 293细胞，在转染后7＊ 天出现了典型的细胞病变反应 CPE)，即细芜王氖折光性增强并从培养板底脱落。 四、重组腺病毒的鉴定： 从病毒培养上清中提取DNA后，采用自行设计的针对FCYI的引物进行PCR，对所获得的病毒进行鉴定，结果能扩增出 122hP的目的片段。 五、重组腺病毒的扩增与滴度测定： 鉴定后对病毒进行扩增，并采用终点稀释试验测定病毒滴度为 6二 XIO’Pfu／mlo 由 ERE与 HRE串联重复序列共修饰的 hTERT核心启动子引导 FCY转录的复制缺陷型重组腺病毒构建成功，为评价ERE、HRE以及hTERT核心启动子在卵巢癌靶向转录基因治疗中的应用价值奠定了基础。