丁酸梭菌清液发酵工艺的研究

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丁酸梭菌,又名酪酸梭菌,1933年由日本的宫入近治博士首先发现,是存在于人和畜禽肠道的一种厌氧益生菌。丁酸梭菌作为微生态制剂,它能形成内生芽孢,具有耐高温、耐酸、耐胆盐、耐部分抗生素等特性,在日本等国广泛应用于调理人体肠胃的整肠药,能大幅降低肠炎的发病率,对菌群失调引起的腹泻,抗生素相关肠炎,便秘等有良好疗效,且无任何毒副作用,此外丁酸梭菌作为饲料添加剂和兽药,比非芽孢类活菌制剂有显著的优势。丁酸梭菌不耐贮藏,需要进行包被或放置在低温下。高含量菌粉可以减少包被成本和低温贮藏费用。为了获得高含量菌剂产品,本文采用了清液发酵策略。首先采用单因素实验筛选出最适碳源为葡萄糖,氮源为胰蛋白胨、酵母浸粉和牛肉浸膏。在此基础上,利用Plackett-Burman设计对影响生物量的因素进行评价,筛选出具有显著效应的葡萄糖、胰蛋白胨和酵母浸粉等三个重要因素。用最陡爬坡路径逼近最大生物量区域后,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,结果表明葡萄糖、胰蛋白胨和酵母浸粉最佳浓度分别为3.4%(w/v),4.0%(w/v),3.8%(w/v)。优化后培养基组分为:葡萄糖3.4%(w/v),胰蛋白胨4%(w/v),酵母浸粉3.8%(w/v),牛肉浸膏1.5%(w/v),可溶性淀粉0.1%(w/v),NaCl 0.5%(w/v),乙酸钠0.3%(w/v),半胱氨酸0.05%(w/v),K2HPO4 0.2%(w/v),(NH42SO4 0.1%(w/v),初始pH为7.1。采用上述优化后的培养基,可使发酵液中的生物量提高到3×108cfu/mL,比优化前的6.96×107cfu/mL提高了4.3倍,通过离心收集干燥后,每克干物质的菌数为5.57×1010 cfu。
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