背景近十年来,我国白血病发病以2%的速度递增,白血病是一种起源于造血前体细胞的恶性肿瘤。化疗取得完全缓解后进行造血干细胞移植,是目前治疗白血病可能达到治愈的主要手段。然而化疗的副作用及多药耐药的产生,给临床治疗白血病预期的完全缓解和巩固治疗带来了诸多困难。中药作为我国传统医学领域独具特色的理论与方法。其治疗白血病的手段,具有个体化、辩证施治的明显优势,实践证明中医中药在治疗白血病中显示出重要作用。近年来随着中药及其有效成分抗白血病的临床及实验研究日益广泛,部分研究发现温阳中药中的有效成分可以改变白血病细胞的生物学活性,诱导白血病细胞成熟分化和凋亡。半夏是传统中草药材,内含多种有效活性成分,半夏提取物和生物总碱抑制白血病细胞增殖有相关的研究,但其作用机制尚不明确,值得深入研究。本文力图通过部分中药有效成分改变白血病细胞生物学特性,从而增加对化疗药物的敏感性,取得早期更好的完全缓解。为干细胞移植等可能治愈白血病的技术手段创造条件。目的探索半夏提取物有效成份对耐药白血病细胞株K562-ADR（耐阿霉素的慢性髓系白血病细胞株K562）增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用,探寻其作用的分子水平机制;探讨半夏提取物在耐药的白血病治疗中可能的应用价值。研究方法用氯仿低温超声方法提取半夏有效成分,分别干预经阿霉素处理的K562-ADR细胞株设置0.1 mg/ml、0.3 mg/ml、0.5 mg/ml、0.7 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml 7种浓度,尔后通过IC50计算得半数抑制浓度,再优化浓度范围。观察半夏提取物干预慢性髓系白血病耐药细胞K562-ADR形态学改变;CCK-8法检测半夏提取物对K562-ADR细胞增殖的抑制作用;实时荧光定量PCR检测半夏提取物对K562-ADR细胞检测BAX、BCL-2、MDM2、BCR-ABL、PML基因表达量。研究结果1.阿霉素耐药性检测试验结果显示:K562-ADR细胞耐药倍数是K562的59.39倍。2.CCK-8法检测结果显示:半夏提取物对K562、K562-ADR白血病细胞的增殖均有较强的抑制作用。3.由Graphpad Prism分别计算得半夏提取物对K562组IC50为1.83mg/ml,K562-ADR组IC50为2.36mg/ml。4.RT-PCR和Western blot检测PML在K562-ADR细胞内的表达情况,结果发现K562-ADR细胞中的PML表达高于K562细胞;5.RT-PCR显示:（1）5mg/ml在48h、72h干预时BCL-2有最大值（P<0.01）BAX表达量下调,提示该浓度下BAX/BCL-2途径可能不参与K562-ADR细胞凋亡;（2）1、3、5mg/ml半夏提取物干预48h后影响K562、K562-ADR细胞MDM2、BCR-ABL、PML转录表达水平,结果显示1、3mg/ml半夏提取物可能激活K562-ADR细胞MDM2、BCR-ABL、PML表达;而使用5mg/ml时,BCR-ABL、PML转录水平表达量下调。（3）0.5、0.7mg/ml半夏提取物干预48、72 h后影响K562-ADR细胞转录BAX、BCL-2表达水平,BCL-2表达水平下调（P<0.05或P<0.01）。结论1.半夏提取物能抑制阿霉素耐药的慢性髓系白血病细胞增殖,在较低浓度0.5、0.7mg/ml范围下通过BAX、BCL-2途径促进细胞凋亡,且在48～72小时的抑制生长曲线、凋亡蛋白表达最为稳定。2.在较高浓度1、3、5mg/ml范围的半夏提取物对阿霉素耐药的慢性髓系白血病细胞,BAX、BCL-2 m RNA表达量受半夏提取物浓度和时长影响。3.较高浓度1、3、5mg/ml范围,MDM2及BCR-ABL、PML表达水平受半夏提取物浓度和时长影响,不同浓度m RNA表达量不同。4.耐药的慢性髓系白血病细胞可能通过PML介导调控,5mg/ml半夏提取物干预48h下调PML的表达水平。