伪狂犬病(Pseudorabies, PR)是由I型疱疹病毒科的伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus, PrV)引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。猪是本病毒的天然宿主和贮存者,该病给养猪业造成了巨大的经济损失。预防、控制并最终根除该病是我国当前面临的一项艰巨任务。准确、及时地检测出病原是防止疾病扩散的重要措施之一。目前对猪伪狂犬病毒进行诊断的相应方法有很多,但是真正适合基层使用,方便、简单、廉价、技术要求低且实用的诊断方法很少。利用单克隆抗体的诊断方法在其它疾病的检测中得到广泛的应用,显示出灵敏性高、特异性强等优点。应用单克隆抗体来检测PRV在我国报道还比较少,为了能从感染PRV的动物体内和肉食品中检测出病原,本课题开展了抗伪狂犬病毒抗体杂交瘤细胞株的制备以及初步鉴定,为后续实验的展开做好铺垫。用PK-15细胞培养的伪狂犬病毒闽A株(PRV-FA)经差速离心和蔗糖密度梯度离心,纯化抗原。本实验同时制备伪狂犬病毒细胞培养物和鸡胚培养物,用伪狂犬鸡胚培养物作为免疫原来免疫BALB/c小鼠,而用纯度更高的伪狂犬病毒的细胞培养物作为间接ELISA的包被抗原建立间接ELISA,用来筛选融合后的杂交瘤细胞,尽可能的避免非特异性蛋白对筛选的干扰,降低假阳性的几率,提高阳性株筛选的效率和准确性。取免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合应用间接ELISA筛选,经过3次有限稀释法克隆,获得了2株能稳定分泌抗伪狂犬病毒蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为4G9E9,1H9C9,随后对这两株单克隆抗体杂交瘤细胞株进行鉴定,经鉴定这2株杂交瘤细胞株均为IgG1亚类,4G9E9和1H9C9杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1:6400和1:12800以及1:25600和1:102400。2株单克隆抗体与猪繁殖呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、乙脑病毒、细小病毒均不发生交叉反应,显示了良好的特异性。连续培养15代,2株杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体且效价不变。腹水经硫酸铵沉淀法处理后,测得纯化后其蛋白含量为2.412 mg/mL。这2株单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得为下一步建立针对PRV的快速诊断方法的建立奠定基础。