目的:　　 动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是严重威胁人类健康的常见病和多发病。血管平滑肌细胞(Vascularsmoothmusclecell，VSMC)的表型转化、增殖、迁移是动脉粥样硬化发病的关键因素。血小板源性生长因子(Platelet-derivedgrowthfactor，PDGF)是一种较强的促有丝分裂剂和化学趋化剂，在正常动脉中无表达，当血管受损深达中膜时，其被大量分泌，释放入血，与其受体结合，促进平滑肌细胞由中层向内层的迁移。Rho激酶(Rhoassociatedkinase，ROCK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，参与调节细胞的多种行为与功能，如细胞迁移，细胞增殖，细胞粘附，细胞骨架重组以及其他炎症反应等。ROCK有两种亚型，ROCKⅠ和ROCKⅡ。本实验室前期研究显示:ROCKⅠ在血管平滑机细胞的迁移中起主导作用，而ROCKⅡ对迁移影响不明显。伴随着血管平滑肌细胞的增殖和迁移，有大量的细胞因子表达。其中，基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases，MMPs)是一组锌离子依赖的内肽酶，由VSMC、巨噬细胞及其他一些细胞产生，可降解细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)，为血管平滑肌细胞的迁移扫清道路。肌细胞增强因子2A(myocyteenhancer-bindingfactor2，MEF2A)是一类DNA结合蛋白，有调控VSMCs表型转化，调控VSMC增殖的作用。本文旨在研究PDGF刺激下，ROCKⅠ/ROCKⅡ对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(A7r5)中MMP-2、MMP-9和MEF2A表达的影响，及ROCKⅠ和ROCKⅡ两种亚型之间的功能差异，进一步探讨血管平滑肌细胞增殖及迁移的分子机制。为研究动脉粥样硬化的发病机制及诊断预防提供新的思路，相关分子信号机制的研究为药物寻找靶点奠定理论基础。　　 方法:　　 (1)利用明胶酶谱法检测PDGF对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(A7r5)、人动脉血管平滑肌细胞(Aos)、豚鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞(Gba)、兔血管平滑肌细胞(SM3)中MMP-2、MMP-9活性的影响;(2)用10ng/mlPDGF刺激VSMC3h、6h、12h、24h后分别提取RNA，利用RT-PCR检测MMP-2、MMP-9及MEF2A在mRNA水平的表达;(3)采用RNA干扰技术，分别使ROCKⅠ/ROCKⅡ表达下调以及同时下调ROCKⅠ/ROCKⅡ，利用RT-PCR、WesternBlot检测基因下调后细胞内MMP-9和MEF2A在mRNA水平和蛋白水平表达的变化。利用ROCK抑制剂Y-27632检测MMP-9和MEF2A的表达;(4)构建ROCKⅠ、ROCKⅡ过表达质粒，载体为pMD19-TSimpleVector，稳定转染，利用RT-PCR检测基因过表达后细胞内MMP-2、MMP-9和MEF2A在mRNA水平表达的变化。　　 结果:　　 (1)明胶酶谱结果显示，在大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(A7r5)、人动脉血管平滑肌细胞(Aos)、豚鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞(Gba)中，10ng/mlPDGF刺激后MMP-2活性明显增强，而兔血管平滑肌细胞(SM3)中不明显。(2)RT-RCR结果表明PDGF促进血管平滑肌细胞(A7r5)中MMP-2、MMP-9及MEF2A的表达，且呈现时间效应关系，在12小时时达到峰值。(3)siRNA转染后，ROCKⅠ和ROCKⅡ表达明显下调，其中ROCKⅠ表达下调了77.3％，ROCKⅡ表达下调了91.7％;在siRNA瞬时转染和抑制剂Y-27632作用下，ROCKⅠ和ROCKⅡ均抑制了PDGF诱导的MMP-9和MEF2A的表达，两种亚型对MMP-9的作用无明显差别，而ROCKⅡ对MEF2A的抑制作用相对显著。(4)稳定转染ROCKⅠ/ROCKⅡ过表达质粒;上调ROCKⅠ/ROCKⅡ基因表达后，ROCKⅠ/ROCKⅡ均促进MMP-2、MMP-9和MEF2A的表达，两种亚型之间无明显差别。　　 结论:　　 (1)ROCKⅠ和ROCKⅡ对PDGF诱导的血管平滑肌细胞中MMP-2、MMP-9的表达起调控作用，两种亚型对MMP-2、MMP-9的作用无明显差别;MMP-2、MMP-9可能是Rho/ROCK信号通路影响VSMC迁移的下游分子;(2)ROCKⅠ和ROCKⅡ对PDGF诱导的血管平滑肌细胞中MEF2A的表达起调控作用，其中ROCKⅡ作用明显，MEF2A可能是Rho/ROCK信号通路影响VSMC增殖的下游分子。