【摘 要】
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研究背景与目的胃癌是世界第五大常见恶性肿瘤,是恶性疾病主要相关死因之一,其5年总体生存率不足30%。胃癌发病的具体原因尚不完全明确,当前研究的重点仍是对其分子特征及发病机制进行深度探索。长链非编码RNA在几乎所有的生物学过程中发挥关键作用,包括干细胞维护,肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。LncRNA在胃癌的发生发展中扮演越来越重要的角色。课题组早期通过基因芯片筛选出一个全新的LncRNA（CENP
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研究背景与目的胃癌是世界第五大常见恶性肿瘤,是恶性疾病主要相关死因之一,其5年总体生存率不足30%。胃癌发病的具体原因尚不完全明确,当前研究的重点仍是对其分子特征及发病机制进行深度探索。长链非编码RNA在几乎所有的生物学过程中发挥关键作用,包括干细胞维护,肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。LncRNA在胃癌的发生发展中扮演越来越重要的角色。课题组早期通过基因芯片筛选出一个全新的LncRNA（CENPN-AS1）,目前尚未有人对其进行任何报道,我们预测它可能调控胃癌的发生发展。本研究以LncRNA CENPN-AS1为研究对象,探讨其在胃癌中的潜在作用及机制。方法（1）通过q RT-PCR对比检测胃癌细胞与正常胃黏膜细胞中LncRNA CENPN-AS1的m RNA的相对表达量。（2）构建LncRNA CENPN-AS1过表达质粒,并以瞬转的方式作用于胃癌SGC-7901与AGS细胞,通过q RT-PCR检测过表达效率。（3）采用CCK-8法、集落形成实验检测LncRNA CENPN-AS1对胃癌SGC-7901与AGS细胞增殖能力的影响。（4）通过细胞划痕实验检测LncRNA CENPN-AS1对胃癌SGC-7901、AGS细胞水平迁移能力的影响;通过Transwell法检测LncRNA CENPN-AS1对其垂直迁移能力及侵袭能力的影响。（5）采用流式细胞术检测LncRNA CENPN-AS1对胃癌SGC-7901、AGS细胞凋亡的影响。（6）通过Western Blot检测LncRNA CENPN-AS1对胃癌SGC-7901、AGS细胞的增殖、凋亡相关蛋白及关键信号通路的影响。研究结果（1）qRT-PCR结果显示,相比正常胃粘膜上皮GES-1细胞,胃癌SGC-7901、AGS细胞中的LncRNA CENPN-AS1表达量降低,有统计学差异。（2）转染CENPN-AS1过表达质粒后,胃癌SGC-7901、AGS细胞中LncRNA CENPN-AS1的表达量升高,有统计学差异。（3）CCK-8、集落形成实验结果显示:与对照组相比,过表达LncRNA CENPN-AS1组胃癌SGC-7901、AGS细胞的增殖能力受到显著抑制。（4）细胞划痕、Transwell实验结果显示:与对照组相比,过表达LncRNA CENPN-AS1组胃癌SGC-7901、AGS细胞的迁移、侵袭能力受到显著抑制。（5）流式细胞术结果显示:与对照组相比,过表达LncRNA CENPN-AS1组胃癌SGC-7901、AGS细胞的凋亡率升高,有统计学差异。（6）Western Blot结果显示:与对照组相比,过表达LncRNA CENPN-AS1组胃癌SGC-7901、AGS细胞中蛋白GLI2、PARP、C-MYC、PCNA、BCL2的表达量下降,BAX的表达量上升;关键通路蛋白PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、FOXO3A的表达量下降,有统计学差异。研究结论LncRNA CENPN-AS1可能通过PI3K/AKT/FOXO3a通路抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和促进凋亡,发挥抑癌基因作用。
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