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研究背景与目的:乳腺癌(breast cancer,BC)是女性最常见恶性肿瘤,也是导致女性癌症死亡的主要原因。尽管针对原发性肿瘤的系统性全身性治疗可以明显改善乳腺癌患者的预后,但其对转移性乳腺癌治疗效果较差,肿瘤的远处转移仍然是导致乳腺癌患者死亡的主要原因。因此,深入研究乳腺癌转移的分子机制,对诊断和治疗转移性乳腺癌具有十分重要的意义。Fibulin-3是一种分布广泛的细胞外基质蛋白,属于Fibulin糖蛋白家族。Fibulin-3能通过调节细胞与外界环境的相互作用,影响细胞的代谢、增殖、迁移等生理功能。多项研究发现,Fibulin-3的表达水平改变与肺癌、卵巢癌、肝癌等恶性肿瘤的发生、发展有关,但其与乳腺癌的关系却鲜有报道。本课题通过研究Fibulin-3在乳腺癌组织中的表达情况,以及其与患者临床病理特征的相关性,旨在分析Fibulin-3与乳腺癌患者预后的关系;并通过干扰Fibulin-3的表达,研究其对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法:1、高通量测序筛选人乳腺癌MDA-MB-231细胞株和人乳腺癌MDA-MB-231HM高转移性细胞株中差异表达的基因。2、qPCR检测20例乳腺癌组织及20例配对癌旁正常组织中Fibulin-3的表达。3、收集我院204例乳腺癌患者肿瘤样本,制成组织芯片。免疫组织化学检测样本中Fibuln-3的表达情况,分析其与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。4、通过qPCR和Western-Blot检测Fibulin-3在人乳腺癌细胞株中和人正常乳腺细胞株MCF-10A中的表达水平。5、构建Fiblin-3敲除细胞株和Fibulin-3过表达细胞株,qPCR和Western-Blot验证Fibulin-3的表达变化;通过细胞迁移实验和细胞划痕实验验证Fibulin-3与乳腺癌细胞迁移能力的关系。6、统计学分析:SPSS22.0统计软件进行数据分析,计量资料以X—±s表示。使用one-way-ANOVA,two-way-ANOVA,t检验和卡方检验处理实验数据,以α=0.05作为检验水准,P<0.05作为显著性差异的标准;预后分析采用Kaplan-Meier生存分析。结果:1、Flibulin-3在人乳腺癌MDA-MB-231HM高转移性细胞株中的表达水平低于其在乳腺癌MDA-MB-231细胞株的表达(P<0.05)。2、Fibulin-3在癌组织中的表达显著低于其在癌旁正常乳腺组织中的表达(P<0.05)。3、Fibulin-3的表达与患者的淋巴结状态显著相关(P=0.018),Kaplan-Meier生存分析提示Fibulin-3高表达的患者预后较好,Cox回归分析表明Fibulin-3是乳腺癌独立的预后标记物。4、与正常人乳腺细胞株MCF-10A相比较,Fibulin-3在人乳腺癌细胞株中表达下调。5、细胞迁移实验和细胞划痕实验证实,Fibulin-3过表达的乳腺癌细胞株迁移能力下降。敲除Fibulin-3的表达,乳腺癌细胞株迁移能力升高。结论:1、Fibulin-3与乳腺癌的发生、发展有关。2、Fibulin-3可作为预测三阴性乳腺癌患者预后的独立指标。3、Fibulin-3可抑制三阴性乳腺癌细胞的迁移。