近年来,随着药典对金银花药用来源的规范、多行业(药品、保健品、饮料、茶业等)需求的增加,金银花价格高涨。金银花药材、提取物和成方制剂在生产、销售过程中出现了一些违法违规现象,主要包括:金银花和山银花混用;金银花茎叶替代金银花投料;为提高绿原酸含量擅自改变提取工艺。而目前质量控制技术方法落后,远远不能满足药品监管需求。为了应对金银花药材及其制剂出现的上述问题,我们研究建立了多种技术,形成质量控制技术方法组对金银花药材、提取物和制剂进行质量控制。本论文的研究内容与结果有以下几个方面:1金银花与易混淆品山银花的区别技术及其应用1.1金银花药材及其易混淆品的性状和显微鉴别技术金银花药材主要市售伪品为不同植物来源的山银花。两者不同品种间在性状和显微等特征方面具有一定差异。但现有文献大多仅以文字描述金银花与山银花在性状和显微上的区别,并不直观。本研究拍摄了典型性状和显微特征照片,通过图文的形式,翔实、生动地展示了金银花和不同来源山银花的区别特征,为日常监督和检验提供了更为直观的参考依据。此外,归纳了金银花与山银花药材的鉴别特征,发现花冠和花萼表面被毛情况以及非腺毛排布情况是药材鉴定中的重要特征。以上成果收录于中国食品药品检定研究院编纂的《实用中药材传统鉴别手册》。1.2市售金银花药材掺入山银花销售的问题及其检测技术发现部分市售金银花药材存在掺入山银花进行销售,以谋取高额利润的问题。引入分子生物学技术,结合传统的性状、显微、化学成分研究和产地调研考察,精准地鉴定了市售金银花中掺入山银花的植物来源为灰毡毛忍冬。深入研究了加工方式对灰毡毛忍冬花蕾外观的影响,明确地提出并验证了“为了接近金银花外观,掺入的灰毡毛忍冬花蕾采用低温烘干或直接干燥等慢失水干燥方式”的科学判断。综合考虑各检验技术的专属性、灵敏度、检验成本等,优选化学成分测定技术,针对性地建立了金银花药材中掺入山银花的HPLC-ELSD检测方法。经检验,收集的41批市售金银花药材中,15批检出了山银花特征三萜皂苷,占总批次的36.6%,问题金银花药材中,山银花掺入比例在4%~23%。市售金银花药材中掺入灰毡毛忍冬花蕾的问题比较严重。掺入山银花来源和加工方式的深入研究以及检测方法的建立,为市售金银花药材的科学监管提供了坚实的技术保障和依据。在此基础上完成了国家药典委员会“2015年版中国药典多来源中药材专项科研课题-易混淆药材金银花与山银花”和山东省食品药品监督管理局“2015年山东省药品抽验计划任务-金银花药材”等研究和监管任务。1.3金银花制剂以山银花投料的问题及其检测技术以山银花的特征三萜皂苷作为指标成分,建立了6种金银花制剂及相关金银花提取物以山银花投料的HPLC-ELSD检查方法。对6种金银花制剂121批样品进行检验,其中77批检出了山银花特征三萜皂苷,总检出率为63.6%;43批金银花提取物中13批检出了山银花特征三萜皂苷,占总批次的30.2%。上述结果表明金银花提取物和制剂以山银花投料的问题比较严重,相关生产企业对金银花原料把关不严,或涉嫌故意以山银花投料,应加大监管力度,督促企业严格按照处方规定投料。研究建立的银黄片和银黄颗粒山银花检查技术均已收载于《中国药典》2015年版第一增补本,银黄滴丸的山银花检查技术已经在国家药典委员会网站上公示。2金银花与忍冬藤区别成分研究及其应用忍冬藤为金银花的藤茎,属于同一药用植物的不同药用部位,在金银花提取物、制剂中可能存在以忍冬藤违规替代金银花投料的问题。我们通过忍冬藤与金银花的成分比较,发现了一种忍冬藤的特征成分:5-0-[4’-CO-(βD-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸。从忍冬藤中分离鉴定了该成分并报道其完整的核磁共振图谱数据。通过HPLC色谱图中绿原酸与5-0-[4’-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸峰面积的比值,研制了判断金银花提取物是否掺杂忍冬藤投料的检测方法。对48批金银花提取物进行检验,19批样品低于规定的最低限度值,涉嫌违规以忍冬藤进行投料,占总批次的39.6%。结果表明,市售金银花提取物掺入忍冬藤进行投料的问题比较严重。忍冬藤特征成分制备、含量测定及其在金银花提取物掺伪投料中的应用等3项技术均已获得国家知识产权局发明专利授权(专利号:ZL201610395262.1、ZL201610395041.4、ZL201610394794.3)。3金银花制剂的多成分质置控制技术为了片面地提高质量标准所测指标成分绿原酸的含量,部分生产企业存在改变金银花提取工艺,以减少投料量,节约成本的违规行为。不同提取工艺对金银花提取物中主要活性成分一咖啡酰奎宁酸类成分的组成和比例影响非常显著,进而可能影响药品疗效。本研究持续开发了HPLC外标法、一测多评、特征图谱、对照提取物等多种技术,对金银花提取物和制剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-0-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸进行定性、定量控制,防止企业为提高绿原酸含量擅自改变提取工艺。银黄片、银黄颗粒及相关金银花提取物的特征图谱鉴别技术已收载于《中国药典》2015年版第一增补本;银黄滴丸的特征图谱鉴别技术已经在国家药典委员会网站上公示;制备的金银花对照提取物组成、比例合理,目标成分总含量超过70%,制备方法简便,已获国家知识产权局发明专利授权(专利号:ZL201410080316.6)。本论文取得的创新点有:1构建了金银花药材、提取物和制剂三个层次的质量控制体系,全面提升银黄系列制剂及其提取物质量标准,收入《中国药典》。所建立的药品标准已应用于全国100余家相关药品生产企业的产品质量控制,全面提高了我国金银花药材及其制剂的质量控制水平,有效监督和控制了金银花行业违法违规问题。2从忍冬藤中分离鉴定了 5-O-[4’-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸,并通过HPLC色谱图中上述成分与绿原酸色谱峰的比例关系,建立了金银花提取物及相关产品的原料是否掺杂忍冬藤的检测方法。3制备了新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-0-二咖啡酰奎宁酸、3,5-0-二咖啡酰奎宁酸、4,5-0-二咖啡酰奎宁酸等6种目标成分质量比例关系约为0.2~0.4:1.0:0.3～0.5:0.2～0.4:0.1～0.3:0.2～0.4,其总质量分数超过70%的金银花对照提取物,并将上述对照提取物应用于抗感颗粒处方药味金银花的多成分鉴别。4建立了银黄系列制剂中6种咖啡酰奎宁酸的HPLC 一测多评含量测定方法、特征图谱测定方法,应用于银黄系列制剂质量标准研究,实现多成分同步测定,整体评价药品的质量。