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目的;观察雷公藤内酯醇对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用,并探讨其作用机制。
方法;38只Wistar大鼠,适应性喂养1周,随机分为:正常组,生理盐水和福氏佐剂对照组(NS/CFA组),左旋咪佐对照组(LMS组),Tri对照组,低剂量Tri组(LTri组),高剂量Tri组(HTri组),每组5只;模型组8只。模型组和治疗组采用豚鼠脊髓匀浆和福氏完全佐剂制成乳剂,每只大鼠的双后足掌皮下和尾部近端注0.4ml和0.1ml乳剂,注入后即刻、24h、48h腹腔注射LMS10mg/kg,制成急性EAE。治疗组在模型组的基础上予以不同剂量雷公藤内酯醇,在免疫同时及每间隔24h连续16d经腹腔注射2%丙二醇溶解的Tri0.2mgkg-1.d-1(LTri组)和0.4mgkg-1.d-1(HTri组)。NS/CFA组采用无豚鼠脊髓匀浆的NS/CFA0.5ml混合液注入双后足掌皮下和尾部近端,用量同模型组,但不注射LMS;LMS对照组每间隔24h仅腹腔注射LMS,用法同模型组,但不注射NS/CFA或乳剂。观察临床表现并加以评分,采用流式细胞仪检测外周血CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值,ELISA法检测IL-6水平;应用免疫组织化学技术检测ICAM-1的表达;HE染色和Loyez氏髓鞘染色观察病理和髓鞘改变。
结果;模型组和LTri组发病率分别为87.5%和40%,HTri组发病率为0%。模型组神经功能评分为3.27±1.70,LTri组神经功能评分为0.34±0.24分,HTri组神经功能评分为0,模型组临床评分明显高于HTri和LTri组(p<0.01,p<0.01);LTri组的潜伏期和临床评分与模型组相比有显著性差异(p<0.01)。HTri组外周血CD8+细胞数为32.32±1.13;CD4+/CD8+为1.37±0.08;IL-6为65.60±26.49pg/mL,ICAM-1为2.31±1.23,较模型组和Ltri组明显增高和降低(p<0.05,p<0.01,p<0.05,p<0.05)HTri组CD4+细胞数与模型组和LTri组比较差异无显著性。
结论;雷公藤内酯醇对EAE的治疗作用有剂量相关性,高剂量Tri能抑制大鼠EAE的发生,低剂量Tri能减轻大鼠EAE的病情;雷公藤内酯醇对EAE的治疗作用机制是通过增高CD8+细胞数、降低CD4+/CD8+值调节机体免疫平衡和降低IL-6抑制免疫反应;降低ICAM-1表达阻止或减少外周活化的CD4+阳性淋巴细胞侵CNS,避免了EAE发生或减轻病情。