药用桑黄的培养及鉴定研究

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桑黄具有活血,止血,化饮,止泻之功效。目前桑黄市场需求量较大,而野生资源匮乏,人工栽培难度大。因此通过固体、液体发酵得到大量菌丝体及活性物质意义重大。本论文从四个方面对药用桑黄进行了研究。一是对桑黄固体、液体培养基的优化实验研究;二是对生长于桑树上的桑黄进行了鉴定,包括生物学特性的鉴定、子实体形态的宏观观察、显微镜、扫描镜的微观观察、以及基于ITS序列的分子鉴定;三是对不同树种上采集到的桑黄菌进行了比较研究,包括外观形态、多糖、黄酮等有效成分。四是对生长在不同树种的桑黄子实体中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Se、Pb、K比较,得到以下结果:固体培养最适氮源为黄豆+玉米的综合氮源,最适碳源为葡萄糖,最适初始pH为6,最适培养温度为27℃-31℃;以生物量、胞外多糖、胞外黄酮为指标,得出了桑黄深层发酵的最适条件:黄豆+玉米为100g/L,葡萄糖为30g/L,KH2P043g/L,MgS040.75g/L,维生素B11mg/L,初始pH为6。液体培养过程中胞外酶的变化情况表明:桑黄菌拥有丰富的胞外酶系。淀粉酶活高峰最先出现,其次纤维素降解酶滤纸纤维素酶、羧甲基纤维素酶活高峰都出现在第6d,木质素降解酶漆酶、愈创木酚酶、多酚氧化酶活性高峰分别出现在第8d,10d,10d。酶得变化表明了菌丝体在生长过程中对外部营养物质利用情况变化。还原糖含量随着培养时间逐渐下降,且在第6d和第8d出现了一个小高峰,蛋白质浓度变化情况与胞外酶活变化大体相同,分别在第6d与第8d都出现了高峰。野生的桑黄子实体可以寄生、腐生于不同的阔叶树上。采集了桑树、杨树、暴马丁香树、松树4种树种的桑黄子实体,通过生物学特性的研究,以及外观形态的描述观察,鉴定了桑黄的真伪;通过ITS序列的分子鉴定,进一步确定不同树种的桑黄物种,桑树桑黄为 Phellinus rhabarbarinus、暴马丁香树桑黄为 Phellinus Inonotusbaumii、杨树桑黄为 Fuscoporiagilva、松树桑黄为 Phellinus hartigii。对桑黄子实体的有效成分多糖、黄酮含量进行比较分析,初步判断出桑树桑黄质优,抗肿瘤活性成分多糖含量明显高于其他树种的桑黄子实体。对发酵所得菌丝体以及不同来源的桑黄子实体中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Se、Pb、K进行了比较,得出桑黄菌丝体中Fe、Zn、K的含量高于子实体,有害的重金属Pb低于子实体。
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