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实验选取临床检查无异常的新生荷斯坦犊牛颈动脉放血致死，无菌开腹切取腹腔内小肠网膜约60g，D-Hank’s液洗涤，分离去除脂肪组织中肉眼可见的纤维成份及血管，按照本实验室建立的犊牛前脂肪细胞培养方法进行脂肪细胞的原代单层培养，整个培养期为14d。培养至第8、12d，用油红0工作液和台盼蓝工作液对脂肪细胞分别进行染色，以便观察其形态；第14d，选取体外培养单层生长良好的脂肪细胞，在培养介质中分别添加0、10、20、30、40、50μg/L胰岛素样生长因子I(IGF-I)，0、100、250、500、750、1000nmol/L胰高血糖素样肽I(GLP-I)，0、10、20、30、40、50mg/L乳酸(每浓度梯度设三个重复)，再分别进行培养24tl后提取细胞总RNA，20倍稀释后用Pharmacia Biotech公司的RNA/DNA calculator测定总RNA的浓度和纯度，并用DEPC-H<,2>O将所有样品的总RNA浓度调节一致(以消除提取RNA过程中总RNA含量差异，确保定量精确性)。将常规RT-PCR扩增HSL mRNA模板的纯化产物进行质粒的重组、克隆和序列测定。用灭菌纯水将以上重组质粒按梯度稀释后作为荧光定量PCR反应的阳性标准模板，按已建立的PCR反应体系和条件在ABI PRISM 7000型荧光定量PCR扩增仪上扩增，机器自动绘制出标准曲线。将，IGF-I、GLP-I、乳酸处理的脂肪细胞总RNA的反转录产物以标准曲线为参照在ABI PRISM 7000型荧光定量PCR扩增仪上扩增，数据用SPSS10.0软件统计分析，观察IGF-I、GLP-I、乳酸处理的脂肪细胞HSL mRNA丰度的变化。IGF-I、GLP-I、乳酸处理的脂肪细胞在低温操作室参照南京凯基总蛋白提取试剂盒提取细胞总蛋白，采用华特生蛋白定量试剂盒测定所提细胞总蛋白浓度，最后用南京建成脂肪酶测定试剂盒测定IGF-I、GLP-I、乳酸处理的脂肪细胞HSL活性变化，数据同样用SPSS40.0软件统计分析。实验结果表明：1.IGF-I、GLP-I、乳酸对HSL mRNA表达的抑制作用存在剂量依赖性。[GF-I浓度>20pg/L、GLP-I浓度≥100nmol/L、乳酸浓度>20mg/L时对I-ISL mRNA的表达抑制作用显著(P<0.05或0.01)。2.IGF-I、GLP-I、乳酸对HSL活性的抑制作用同样存在剂量依赖性。IGF-I浓度>30pg/L、GLP-I浓度≥100nmol/L、乳酸浓度>40mg/L时对}tSl。活性的抑制作用明显(P<0.05或0.01)。3.IGF-I、GLP-I、乳酸可通过抑制奶牛脂肪细胞内HSL mRNA表达及HSL活性而抑制脂肪的分解，从而促进脂肪沉积。