HPVL1C-末端共同序列多肽抗血清评价HPV感染检测能力的研究

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目的:本课题组前期研究表明由本课题组发现并已申请专利的人乳头瘤病毒(HPV)主要衣壳蛋白(L1)C-末端共同保守序列多肽,诱导动物产生的抗血清,对宫颈癌组织中多种 HPV型别具有检测能力。本人课题的研究目的是确定 HPV多肽抗血清是否具有针对更多型别 HPV L1的广谱反应能力,和对临床标本内的HPV是否具有良好的广谱检测能力。  方法:1)收集大量临床宫颈细胞学标本,以确定临床上宫颈病变的检出率;2)对一份标本采用Nest-PCR实验检测病毒基因的存在与否,确定 HPV阳性检出率;3)对相同的另一份标本以本课题组的HPV L1多肽抗血清为探针进行 ELISA实验,确定标本中病毒 L1蛋白的存在与否,从而确定 HPV阳性检出率;4)对以上检查方法均是阳性的标本以 HPVL1多肽抗血清为一抗进行免疫细胞化学实验(ICC);5)采用统计学软件,比较分析以上检查方法。  结果:1)共收集到宫颈 TCT标本269例,细胞学诊断宫颈病变者12例,检出率为4.46%。2)Nest-PCR中,对所有标本应用HPVL1通用型引物 MY09/11扩增,得到 HPV DNA阳性标本30例,HPV阳性检出率为11.15%;对 MY09/11扩增后结果为 HPV DNA阴性的所有标本再应用HPVL1通用型引物 GP5+/6+扩增,检出 HPV DNA阳性标本51例,HPV阳性检出率为21.34%;Nest-PCR共检测到81例 HPV DNA阳性标本,HPV DNA总检出率为30.11%。3)263例宫颈 TCT标本进行 BA-ELISA检测,共检出阳性标本117例,HPV阳性检出率为44.49%,免疫学检测方法得到的HPV阳性检出率明显高于 HPV基因检测(P<0.005)。4)免疫细胞化学实验证实 L1多肽抗体能特异性识别含有 HPV病毒颗粒的宫颈细胞。  结论:1)宜昌地区宫颈细胞学 TCT检查得到的宫颈病变检出率为4.46%,略高于全国水平。2)HPV L1基因保守序列的通用型引物 MY09/11和GP5+/6+通过套嵌方式,既增强了标本中微量病毒的载量,又增加了检测型别,提高了阳性检出率。但因引物扩增型别有限,不能完全涵盖病毒所有型别。3)HPV免疫学(BA-ELISA)检测不受病毒型别限制,可以更广泛检测到几乎所有病毒的型别。4) HPVL1多肽抗体能特异性识别含有 HPV病毒颗粒的细胞。5)本课题组制备的HPV L1多肽抗体对 HPV L1具有广谱反应能力和明显的多价性,对已知和未知型别的HPV都具有良好的检测能力。本课题的研究为找到更全面更准确更简便的宫颈病变筛查方法提供了有效依据。
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