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虫生真菌广泛用于害虫生物防治,具有安全,无污染,不易形成抗性等优点,是发展害虫绿色防控技术的一种重要选择。土壤是一个巨大的虫生真菌菌种库,从土壤中分离、鉴定和筛选昆虫病原真菌是真菌杀虫剂研发的重要措施。基因改良能有效提高虫生真菌的杀虫效果,针对目标害虫的RNAi敏感基因,在虫生真菌中表达该基因的dsRNA片断,是一种新的虫生真菌基因改良途径。本文从内蒙古自治区不同地区采集了26个土壤样品,从中分离了26个菌株,并对其进行了鉴定,测定了其中五个菌株对烟粉虱的生物活性。并且,以斜纹夜蛾SlDorsal基因为靶基因,构建了沉默载体,并转化球孢白僵菌Beuaveria bassiana,获得了一株对斜纹夜蛾具有较强生物活性的工程菌株。具体研究结果如下:主要依据菌落、分生孢子与产孢结构的形态学性状,以及分子生物学方法比对分析ITS1-5.8S-ITS4 rDNA基因和β-微管蛋白基因的同源性,对所分离的菌株进行了鉴定,其中,MS-10、MS-12、MS-15为淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus;MS-25菌株确定为球孢白僵菌B.bassiana;MS-01、MS-06、MS-19为蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum;MS-02、MS-03、MS-05、MS-08、MS-13、MS-16、MS-18、MS-22、MS-23、MS-24为蜡蚧菌Lecanicillium muscarium;MS-14为肉色笋壳菌Peniophora incarnata;MS-20为顶孢霉Schizophyllum commune;MS-04、MS-07、MS-21属于枝孢菌属Cladosporium,MS-26属于裂褶菌霉属Acremonium,尚无法鉴定到种;而MS-09和MS-17菌株形态上疑似拟青霉属Paecilomyces,但未扩增到相应的基因序列,尚无法鉴定。测定了其中五个菌株MS-25、MS-12、MS-15、MS-18、MS-10对二龄烟粉虱的致病力,在孢子悬浮液浓度为108 spores/mL,处理后第10天MS-12、MS-15、MS-18、MS-25、MS-10菌株对烟粉虱的校正死亡率分别达到了92.4%、91.6%、89.9%、88.1%、86.7%,MS-18和MS-15致死中时间LT50为4.5 d,MS-10和MS-12为5.5 d,MS-10菌株的为6 d。以球孢白僵菌Bb01菌株为出发菌株,采用原生质体转化法构建重组菌株。实验发现,使用1%蜗牛酶+2%纤维素酶的组合酶,在温度30℃、pH7、0.7 mol/L NaCl稳渗液下酶解5小时,获得的原生质体最多;通过30%PEG4000介导法将含有斜纹夜蛾Sl Dorsal基因片断的重组载体转化球孢白僵菌Bb01菌株原生质体,筛选得到了1株能够稳定遗传的重组菌株Bb01-SlDorsal(保藏号为:CCTCCM 2015721)。采用浸渍法测定了重组菌株Bb01-SlDorsal对二龄斜纹夜蛾幼虫的毒力,在处理后第10天,Bb01-SlDorsal和Bb01菌株的LC50分别为0.34和0.72(×106 spores/mL);当使用浓度为5×107 spores/mL时,Bb01-SlDorsal和Bb01菌株半致死时间LT50分别为5 d和6 d,说明重组菌株比原始菌株的毒力更高。