研究背景及目的肺癌是最常见的肿瘤疾病,严重危害人们的生命健康。基于肺癌的生物学特征,治疗效果和预后特点,世界卫生组织将其分为小细胞肺癌(Small cell lung cancer)和非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer)。肿瘤是一种全身性疾病,肺癌也不例外。即使是早期的肺癌在体内也可能存在微小转移灶,因此肺癌的治疗以综合治疗为主。近10年来,肺癌的诊断技术和治疗方法有了很大提高,但是肺癌患者总体预后仍不理想。尽管Ⅰ、Ⅱ期患者通过手术有治愈的可能,然而在实际临床工作中,只有10%-20%的患者诊断时属于早期,绝大部分患者就诊时已属晚期无法行根治性手术。以铂类为主的两药联合化疗成为其主要治疗手段,但多药耐药的产生往往导致化疗的失败。虽然针对肺癌多药耐药已有大量研究,但是其根本机制仍未明了。研究发现肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)、谷-胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)和拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)在肿瘤的耐药中发挥重要作用。聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1[Poly(ADP-ribose)merase-1,PARP-1]是存在于多数真核细胞内的蛋白核酶,其维持基因组稳定,调节基因转录。课题组前期研究表明,PARP-1在肺腺癌顺铂耐药细胞株中表达明显上调,第三代PARP-1抑制剂PJ-34可诱导细胞凋亡,抑制DNA损伤修复,增强肺腺癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性。本研究诣在探讨五种耐药相关基因在肺腺癌顺铂耐药细胞及亲本细胞间的表达差异以及PJ34对耐药相关基因表达的影响,寻找对顺铂继发耐药起关键作用的基因,为PJ34在铂类耐药非小细胞肺癌患者的应用,肿瘤的个体化治疗提供理论依据。研究方法1、体外培养人肺腺癌细胞株A549及其顺铂耐药株A549/DDP,使用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(tetrazolium-based eolorimetric assay,MTT)法药敏实验验证肺癌顺铂耐药细胞系的耐药指数。2、实时荧光定量PCR法(QRT-PCR)检测肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP及其亲本株A549内五种耐药相关基因P-gp、LRP、MRP、GST-π、TOPOⅡαm RNA的水平以及给予不同剂量和不同处理时间的PJ34后A549/DDP细胞内五种耐药相关基因的变化。研究结果1、与亲本细胞株A549相比,顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药指数提高了9.7倍。2、A549/DDP及A549细胞内LRP、MRP、P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱα均有表达,但LRP、MRP、P-gp、GST-π在A549/DDP细胞内的表达水平明显高于A549细胞,差异有统计学意义,TOPO-Ⅱα在两种细胞内的表达差异无统计学意义。3、给予不同浓度(0、3、6、12、24 mg/L)PJ34处理24 h后,A549/DDP细胞内MRP表达水平下降,差异有统计学意义,P-gp表达水平下降,差异有统计学意义,且二者呈明显的浓度依赖性,而LRP、GST-π、TOPO-Ⅱ表达量随PJ34浓度的增加未见明显变化。4、3 mg/L的PJ34分别处理24、48、72 h后A549/DDP细胞内MRP表达量随给药时间的延长逐渐下降,差异有统计学意义,P-gp表达量随给药时间的延长逐渐下降,差异有统计学意义,呈明显的时间依赖性,而LRP、GST-π、TOPO-Ⅱα表达量随时间延长未见明显变化。5、PJ34单药组较对照组MRP m RNA水平降低差异有统计学意义,P-gp m RNA水平降低,差异有统计学意义;PJ34联合顺铂组较顺铂单药组MRP m RNA水平降低,差异有统计学意义,P-gp m RNA水平降低,差异有统计学意义,PJ34单药组较PJ34联合顺铂组MRP、P-gp m RNA水平未见明显变化。研究结论1、LRP、MRP、P-gp、GST-π可能参与了A549/DDP细胞对顺铂的继发耐药。2、PJ34可能通过下调MRP、P-gp m RNA转录水平而间接增加顺铂对DNA的损伤,部分逆转顺铂耐药。