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论文以转crylAb基因水稻为材料,采用组合色谱、电泳及质谱技术对该基因的表达产物CrylAb杀虫蛋白进行了纯化、鉴定工作,为进一步评价转Bt基因植物表达蛋白的生物安全性和环境行为奠定基础;论文对CrylAb杀虫蛋白的色谱纯化、肽谱的鉴定及蛋白质的酶解方法上开展了一系列研究工作,并研究了溶胶-凝胶法及IMAC法固定胰蛋白酶的方法以及对该固定化酶对蛋白的降解效率进行了评价。本论文共分五章。第一章分别介绍了转基因植物的安全性问题,目标蛋白的提取纯化、鉴定方法及酶的固定化技术。第二章介绍了利用组合色谱法从植物中提取纯化CrylAb蛋白。采用制备级离子交换和疏水层析方法初步纯化CrylAb,再采用多次循环离子交换色谱分离法进行精细纯化,最后用SDS-PAGE法确证蛋白的纯度和表观分子量。结果表明,实验所设计的色谱分离纯化策略能够获得高纯化的CrylAb蛋白。杀虫活性研究也表明,纯化后的蛋白没有变性,仍保持了较高的杀虫活性。第三章介绍了用基质辅助激光解析-飞行时间质谱对纯化的CrylAb蛋白的酶切肽段进行肽质量谱图分析,经数据库对照分析,肽质量数据与数据库搜索肽段质量的吻合率达80%,确证了纯化的蛋白样品含有CrylAb的特征肽段。为CrylAb基因在不同转基因植物中表达产物的比较奠定了基础。第四章研究了溶胶凝胶包埋法固定胰蛋白酶（trypsin）的方法,以期得到高效的蛋白质酶解反应介质。考察了凝胶成份对成膜质量以及成膜介质对凝胶薄膜中酶的稳定性和活性的影响,并以牛血清白蛋白（BSA）为目标蛋白比较了溶胶凝胶固定化酶与溶液态酶的稳定性和催化活性。结果表明,TEOS与MTMS比例为1∶1时,凝胶膜性质较好,胰蛋白酶能保持很高的活性和稳定性;BSA酶解肽段的HPLC分析结果表明,溶胶凝胶膜固定的trypsin的酶解效率及稳定性要高于溶液态酶。第五章研究了以硅胶-壳聚糖复合基质所制备的金属螯合层析材料（IMAC）用于固定trypsin的方法及稳定性、活性的评价。考察了酶在不同金属离子的IMAC材料（M-CTS-SiO2）上的吸附和解附情况,及pH等因素对酶活性的影响。结果表明,金属离子对固定化trypsin活性有很大影响,其中Zn-IMAC对酶的吸附容量较大（3762±68 IU.g（-1））,而且对固定化酶的稳定性和活性保持较好,是固定胰蛋白酶的一种较好吸附剂,说明了IMAC材料可以通过直接吸附的方法方便地用于酶的固定。并有望用于蛋白质的高通量降解及肽谱鉴定。