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背景：乳腺癌是乳房腺上皮组织的恶性肿瘤，作为女性恶性肿瘤之首，严重危害着女性的身心健康，传统的综合治疗不能解决乳腺癌复发、转移以及耐药等方面的问题。干细胞以其自我更新、无限增殖和多向分化的特点存在于人体各个组织器官中，在人体组织自身修复及肿瘤的产生、进展、转移和复发等过程中发挥着非常重要的作用。实验证实肿瘤中也存在类似于干细胞特性的细胞群—肿瘤干细胞（Tumor stem cells，TSCs），随着人们对肿瘤干细胞探索的深入，通过乳腺癌干细胞的研究有望从细胞水平上解释乳腺癌的整个生物学过程，为乳腺癌的根治带来福音。乳腺癌干细胞的分选、培养、鉴定是乳腺癌干细胞微环境、信号转导、分子制剂等多方面研究的首要步骤及关键前提，但是，乳腺癌干细胞在乳腺癌组织中的比例只有约2％，不经富集难以满足进一步实验需要，近年乳腺癌特异性分子表面标志物的迅猛发展也带来了乳腺癌表面分子标记物的分歧，以及乳腺癌干细胞自我更新、不对称分裂、微环境等的分子机制不够明确，分离技术尚不成熟等问题，使乳腺癌干细胞的分离、培养、鉴定成为乳腺癌干细胞研究者面临的一大技术瓶颈。 目的：本实验通过从MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231乳腺癌细胞系中分选、培养富集及鉴定乳腺癌干细胞(BCSC，breast cancer stem cell)，寻找培养与富集乳腺癌干细胞的方法，了解各系乳腺癌干细胞生物习性，探索乳腺癌干细胞的干性表达，为乳腺癌干细胞的培养奠定实验基础，为乳腺癌干细胞在细胞水平上的研究及针对性治疗奠定基础。 方法：常规贴壁培养MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231细胞系，倒置显微镜观察各细胞形态；FITC-CD44，PE-CD24抗体分别孵育后，采用流式细胞仪分选收集MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231细胞系分子表面标记物CD44-CD24-、CD44-CD24+、CD44+CD24-及CD44+CD24+细胞，其中CD44+CD24-为乳腺癌干细胞，其余三类为对照组；MTT比色法绘制MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231细胞系生长曲线；对贴壁的MCF-7细胞添加碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）进行无血清悬浮培养，流式细胞仪分选CD44+CD24-乳腺癌干细胞，贴壁培养的CD44+CD24-乳腺癌干细胞为对照组；将分选的MCF-7（CD44+CD24-）和分选的其余MCF-7细胞（非CD44+CD24-）进行成球实验，鉴定CD44+CD24-干性表达。 结果：MCF-7细胞系中分子表面标志物CD44-CD24-细胞占56.7%；分子表面标志物CD44+CD24-细胞占19.4%；分子表面标志物CD44-CD24+细胞占5.56%；分子表面标志物CD44+CD24+细胞占18.3%；MCF-7细胞系富含表面标志物CD44-CD24-的乳腺癌细胞；ZR-75-1细胞系中分子表面标志物CD44-CD24-细胞占25.5%；分子表面标志物CD44+CD24-细胞占9.61%；分子表面标志物CD44-CD24+细胞占14.2%；分子表面标志物CD44+CD24+细胞占50.7%表达。ZR-75-1细胞系富含分子表面标志物为CD44+CD24+的乳腺癌细胞；MDA-MB-231细胞系中分子表面标志物CD44-CD24-细胞占83.3%；分子表面标志物CD44+CD24-细胞占8.93%；分子表面标志物CD44-CD24+细胞占1.69%；分子表面标志物CD44+CD24+细胞占6.12%。MDA-MB-23细胞系富含分子表面标志物为CD44-CD24-的乳腺癌细胞；生长曲线显示MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231均呈持续增长，MDA-MB-231细胞生长较MCF-7、MDA-MB-23细胞快；通过无血清悬浮培养CD44+CD24-乳腺癌干细胞由19.4%富集到82.2%；成球实验中CD44+CD24-表型细胞成球数量较分选的其余MCF-7细胞（非CD44+CD24-表型）明显增多,成球率分别为36.5+1.7%，1.1+0.5%。 结论：CD44+CD24-可能不是乳腺癌干细胞唯一的表面标志物；流式细胞仪可成功分选出分子表面标志物为CD44+CD24-的乳腺癌干细胞；MDA-MB-231细胞系较MCF-7、ZR-75-1细胞系生长快；无血清培养法可促进乳腺癌干细胞呈悬浮聚球样生长，可简便、高效地富集乳腺癌干细胞；CD44+CD24-乳腺癌干细胞具备干性表达。