目的 (1) 探讨建立稳定大鼠原位肝移植模型的方法,观察Wistar→SD大鼠肝移植后急性排斥反应的发生,以选择适宜、可靠的大鼠原位肝移植急性排斥模型。(2) 氯化钆、非损伤剂量脂多糖(LPS)及门静脉输血预处理改变Kupffer细胞功能,研究其对移植后Kupffer细胞FasL表达、脾淋巴细胞增殖与杀伤作用的影响。(3) 研究Kupffer细胞功能改变对大鼠肝移植急性排斥反应的影响,探讨其可能的机制,进一步探索Kupffer细胞在同种异基因大鼠肝移植免疫耐受诱导中的作用。通过以上三部分实验,试图进一步阐明Kupffer细胞在大鼠原位肝移植免疫耐受诱导中的确切作用,为进一步利用Kupffer细胞特异性地诱导肝移植免疫耐受的实验研究及临床应用提供依据和基础。 方法 (1) 参照Kamada“二袖套法”,加以适当改进,建立Wistar→SD大鼠原位肝移植动物模型,并以Wistar→Wistar大鼠原位肝移植为对照,观察两组受鼠生存时间,全自动生化分析仪测定术后3天、5天、7天血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)和白蛋白(Alb)水平变化,观察肝脏组织病理改变。(2) 氯化钆、非损伤剂量脂多糖(LPS)及门静脉输血1ml预处理供体Wistar大鼠以改变Kupffer细胞功能,未处理组为对照。肝移植后7天分离上述四组动物肝脏Kupffer细胞,对分离的Kupffer细胞进行计数,流式细胞技术检测Kupffer细胞的FasL表达。各组Kupffer细胞与激活SD脾淋巴细胞混合培养,MTT法检测淋巴细胞增殖,流式细胞技术检测淋巴细胞凋亡百分率。(3) 按上述方法建立Wistar→SD大鼠肝移植动物模型和进行动物分组,观察各组生存时间;观察术后7天肝脏功能和组织病理改变,双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清细胞因子白介素-10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子