短乳杆菌（Lactobacillus brevis）是乳杆菌属中的重要一员,是被公认为安全（generally recognized as safe,GRAS）的食品级微生物,已广泛应用于食品、医疗和养殖等行业。有关短乳杆菌功能和应用上的研究受到许多研究者们的关注,但是由于短乳杆菌的电转化效率很低、外源基因表达难度大以及可供选择的表达载体不多,有关它的基因改造鲜有报道。如果能构建合适的短乳杆菌表达载体,利用基因工程方法对其进行改造,将有利于充分发挥短乳杆菌的应用价值。本研究在乳酸乳球菌胞内蛋白表达载体p MG36e的基础上,以绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）基因作为报告基因,从该载体自身启动子P₃₂以及短乳杆菌CICC6239内源基因启动子P_{slp A}、P_slp、P_ldha、P_gntk、P_pyk中筛选出可在短乳杆菌CICC6239中启动GFP表达的内源基因启动子,丙酮酸激酶基因的启动子(P_pyk),构建了短乳杆菌组成型表达载体p MG36B-P_pyk。在此基础上,本研究将来源于酿酒酵母的3-磷酸甘油脱氢酶基因（Sc GPD1和Sc GPD2）以及3-磷酸甘油酯酶基因（Sc GPP1和Sc GPP2）克隆至p MG36B-P_pyk载体中,初步探究4个单基因在短乳杆菌中的表达情况。结果显示,p MG36B-P_pyk-Sc GPD2和p MG36B-P_pyk-Sc GPP2成功转入,但仅有GPD2成功表达,酶活为19.8 m U/m L;而GPP2未测到酶活。此外,本研究以p MAD载体为基本骨架,将p MG36B-P_pyk载体的P_pyk表达盒克隆进p MAD骨架上,构建了p MAD-P_pyk-GFP、p MAD-P_pyk-Sc GPD1和p MAD-P_pyk-Sc GPP2质粒。但新构建的p MAD-P_pyk系列质粒未能成功电转化进入短乳杆菌细胞中。