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二至丸是中医临床的经典名方,出自明·吴旻《扶寿精方》中的女贞丹,至明·王三才《医便》时更名为二至丸。它由女贞子、墨旱莲组成,组方简单,药性平和,功效确切,作为补益肝肾良药。数百年来,倍受历代医家推崇。现代还用于衰老、神经衰弱、疲劳综合症及更年期综合症等疾病的治疗。中成药二至丸先后被历版《中国药典》(I部)收载。本文以二至丸为研究对象,在遵从复方配伍规律的前提下,以生物活性为评价指标,运用细胞药理学方法,对其复方药效物质基础及作用机理进行探讨,并筛选出其活性成分,以期进一步组成精简方剂,从而为二至丸的二次开发和临床应用提供科学实验数据。 本研究主要内容包括:⑴文献研究表明,二至丸具有补益肝肾、滋阴补血的作用;现代药理表明,二至丸有抗衰老、免疫调节、治疗更年期综合症的作用。可以用雌激素细胞模型MCF-7、抗氧化细胞模型PC12、免疫细胞模型T淋巴细胞来评价二至丸的药理活性。⑵建立了雌激素细胞模型MCF-7、抗氧化细胞模型PC12、免疫细胞模型T淋巴细胞实验方法,并用于二至丸的药理活性评价。实验结果显示,二至丸可以促进荧光素酶活性的增强;抑制活性氧的生成及促进T淋巴细胞的增殖。结果提示,二至丸具有较强的扶正抗衰老、类雌激素作用,对更年期综合症以及机体由于肝肾阴虚所导致的衰老和免疫功能下降有一定的治疗作用。⑶用建立的雌激素细胞模型、抗氧化细胞模型、免疫细胞模型为评价指标,对二至丸的活性成分进行筛选。实验结果显示,各溶剂提取物均可以促进荧光素酶活性的增强;抑制活性氧的生成及促进T淋巴细胞的增殖。结果提示,对于机体由于肝肾阴虚所导致的衰老和免疫功能下降方面,蒸女贞子50%乙醇提取物+墨旱莲50%乙醇提取物是二至丸复方最强的活性部位;而蒸女贞子95%乙醇提取物+墨旱莲95%乙醇提取物是二至丸复方最强的类雌激素作用活性部位,为由有效组分所组成的精简方剂提供一定的理论支持。⑷用建立的雌激素细胞模型、抗氧化细胞模型、免疫细胞模型为评价指标,对二至丸的复方药效物质基础及作用机理进行探讨,为复方使用炮制女贞子(蒸女贞子)以及复方配伍的合理性提供一定的数据支持。结合上述对二至丸活性成分的筛选结果推测,女贞子、墨旱莲以水做溶媒提取活性成分可能提取不充分,故二至煎剂的药理作用还不能完全反映二至丸的药理作用,因此古代医家用二至丸而不用二至汤。⑸基于二至丸的复方机理研究,为其复方药效物质基础提供科学依据;以生物活性为评价指标,对其活性成分的有效组分进行了筛选,为获得由有效成分组成的精简方剂提供理论支持,此研究方法无疑会为现代中药的研究注入新的内容。