论文部分内容阅读
登革热是由登革病毒通过蚊虫叮咬传播引起的急性传染性疾病。其病毒可分为四个血清型(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)。目前登革热已在热带及亚热带地区超过100多个国家流行,威胁到全球超过40%人口的健康。据WHO估计,目前全球每年有约1亿登革热患者,其中有登革出血热及登革休克综合症(DHF/DSS)患者约50万,死亡人数25000人。在我国,登革热主要在沿海地区流行,其中以广东省最为严重。自1978年以来,广东几乎每年都有登革热的流行,且四型登革病毒都有过流行,但广东登革热的研究目前主要集中在DENV-1和DENV-2,而对DENV-3及DENV-4,目前的研究资料都很少。而近十年来,广东主要还是以登革1型病毒流行为主,未有其它型DENV感染病例的报道。因此,密切关注临床登革热病例、及时获取早期样本、分离野生型登革毒株、研究分析其临床和病原学特征,对于全面了解广东登革热的流行形势及特点、病原体的来源及防治等均具有重要意义。研究目的:分析2009年8月发生于广东省广州市的一起家庭聚集性的3例登革热病例的临床和实验室检查特征,从患者血清中分离病毒株并进行全基因组序列测定及分析,了解2009广东登革病毒流行特点及病原体基因组特征,以明确广东登革热的分子流行病学趋势和特点。研究方法:1.收集三例登革热患者的临床及实验室资料,并用Excell表进行统计分析;采用胶体金法检测三名临床登革热病例发病期和恢复期血清登革IgM、IgG抗体,并用ELISA细胞因子检测试剂盒检测三名登革患者发病期及恢复期血清IL-6、IL-10、IFN-γ、sTNFR1(可溶性肿瘤坏死因子受体-1)、TNFα细胞因子的水平;2.采用RT-PCR法扩增血清登革病毒C-PrM基因区序列,并对PCR产物进行电泳及测序分析;3.用C6/36细胞接种感染者血清,以分离登革病毒株;4.用PCR DESIGN和DNAclub软件设计扩增登革病毒全基因组序列的11对PCR引物,经RT-PCR扩增和T载体克隆后进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析。研究结果:1.三名患者发病前均有蚊虫叮咬史,2周内没有外出史,临床特征有发热头痛,颜面潮红,疲乏,关节肌肉痛,皮疹,束臂实验阳性,白细胞减少;3名患者急性期血清登革IgM抗体均为阳性,恢复期血清登革IgG抗体均为阳性;符合登革热的临床诊断;血清5种细胞因子发现,三名患者急性期血清IL-10、sTNFR1、IFN-γ细胞因子水平高于健康对照组和恢复期;2.三名患者血清RT-PCR产物经电泳分析后均出现大小为290bp左右的特异性片段,PCR产物经测序鉴定,证实均为登革3型病毒感染,且三例患者血清病毒序列完全一致;3.用C6/36细胞成功从其中1名患者急性期血清中分离出登革病毒株;经全基因组序列测定,广东登革3型病毒株全长10707bp,进化树显示该病毒株为登革3型病毒亚型Ⅲ毒株;4.与目前测定的最古老的登革3型病毒亚型Ⅲ毒株相比,广东2009年登革3型病毒株发生了碱基变异377个,氨基酸变异39个。结论:1.2009年广东一起家庭聚集性的3例登革热病例均为登革3型病毒首次感染,这是近十几年来广东首次发生本地家庭集聚性登革3型病例。2.这是广东省首次成功培养分离出登革3型病毒株并完成了全基因组序列的测定,进化树分析确定本次流行株为登革3型病毒亚型Ⅲ毒株。该病毒株共发生碱基变异377个,氨基酸变异39个。