【摘 要】
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目的:探索和构建孕鼠宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）动物模型,为研究宫腔粘连的治疗提供更理想的动物模型。探讨人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）移植对孕鼠宫腔粘连子宫内膜的修复效果。方法:1.酶消法从人羊膜中分离提取出人羊膜间充质干细胞,通过细胞免疫荧光和流式细胞术鉴定其表型特征,CCK-8法
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目的:探索和构建孕鼠宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）动物模型,为研究宫腔粘连的治疗提供更理想的动物模型。探讨人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）移植对孕鼠宫腔粘连子宫内膜的修复效果。方法:1.酶消法从人羊膜中分离提取出人羊膜间充质干细胞,通过细胞免疫荧光和流式细胞术鉴定其表型特征,CCK-8法检测其增殖活性。2.随机的将24只SD雌性大鼠分为A、B、C、D四组,每组6只。A组常规饲养;B、C、D组与雄鼠合笼饲养使其妊娠,于妊娠第5.5-6.5天行流产后机械刮宫建立IUA模型。A组:开腹,暴露子宫,不刮宫。B组:流产后刮宫,刮宫后1个动情周期。C组:流产后刮宫,刮宫后2个动情周期。D组:流产后刮宫,刮宫后3个动情周期。各组于观察终点处死大鼠并收集双侧子宫标本,通过HE染色和Masson染色进行建模判断。3.随机的将36只SD雌性大鼠分为对照组、模型组、移植组,每组12只。模型组和移植组进行流产后机械刮宫建立IUA模型,移植组建模后2个动情周期进行h AMSCs移植。移植2周后每组随机处死6只大鼠,通过HE染色、Masson染色,免疫组化评估h AMSCs移植对孕鼠宫腔粘连的修复效果。随机的将各组剩余大鼠按3:1比例与雄鼠合笼,妊娠第14.5天取出双侧子宫计数胚胎植入数目,分析h AMSCs移植对妊娠能力的影响。结果:1.培养约24小时后,大多数原代h AMSCs贴壁生长,单细胞分散或多个细胞的集落形成,呈圆形或多角形。传代h AMSCs呈长梭形螺旋状生长,排列紧密,形态较一致。细胞免疫荧光显示P3（passage 3）代h AMSCs表达波形蛋白,不表达CK19。流式细胞术检测显示P3代h AMSCs高表达CD105（94.39%）、CD90（99.98%）、CD44（99.92%）;低表达CD19（0.11%）、CD45（0.17%）。CCK-8法检测显示h AMSCs的生长特性与大多数间充质干细胞一致。2.与A组相比,B、C、D组腺体数目减少、纤维化程度加重,差异有统计学意义（P＜0.001）;与B组相比,C、D组腺体数目减少、纤维化程度加重,差异有统计学意义（P＜0.001）;与C组相比,D组腺体数目、纤维化程度差异无统计学意义（P＞0.05）。3.与模型组相比,移植组宫腔形态明显恢复,子宫内膜腺体数目增加且腺腔形态恢复、纤维化程度减轻、TGF-β1表达下降、MMP-9和VEGF表达升高,胚胎植入数目增加。结论:1.流产后机械刮宫可以构建稳定有效的孕鼠宫腔粘连动物模型。2.h AMSCs移植可以修复孕鼠宫腔粘连子宫内膜结构、增加腺体数目、减轻纤维化、削弱TGF-β1表达增加的程度、缓解MMP-9和VEGF表达降低的程度,恢复宫腔形态并提高妊娠能力。
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