彩色马蹄莲是天南星科(Araceae)中的一种单子叶观赏植物,被公认为21世纪“花卉之星”,市场前景广阔。但由胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovora subsp. carotovora, p. c. c)引起的细菌性软腐病(bacterial soft rot disease)造成田间和贮藏期彩色马蹄莲大量腐烂死亡,且目前没有理想的防治对策,严重阻碍了彩色马蹄莲的产业化发展。近年来的研究发现,细菌不同细胞间存在化学信号交流,当群体信号分子达到一定密度时,菌体内相关基因即启动表达,该现象被称为群体感应(quorum sensing,简称QS)。在一些原核生物和真核生物中,人们已经鉴定出一些群体感应淬灭酶(quorum-quenching enzyme),这些群体感应淬灭酶能够降解病原菌产生的信号分子使病原菌QS系统不能启动它所调控的基因,从而干扰QS系统,减轻和消除病原菌的致病性,防治病害的发生。胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种是一种革兰氏阴性细菌,其产生的常见信号分子是N-酰基-高丝氨酸内酯类(N-Acyl-homoserine lactone,简称AHL)物质。迄今为止,已经报道并研究的含群体感应淬灭酶活性的菌种不下10种,不同来源的类AHL解酯酶(AHLase)在氨基酸序列上也有所不同。系统发育分析显示,原核生物中的AHL可以划归为两个簇,即AiiA簇和AttM簇。本研究根据已报道的attM基因序列设计引物,从土壤根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) EHA105中PCR扩增获得attM基因,并使基因两端携带合适的限制性酶切位点,将其克隆入植物表达载体pBI121,构建成重组质粒pBI121-attM。重组质粒通过冻融法转化至大肠杆菌DH5α中,经PCR,酶切和测序验证正确后,转化土壤根癌农杆菌EHA105。挑选阳性克隆菌落,对其进行菌落PCR、酶切和测序验证正确后,供转化使用。由土壤根癌农杆菌EHA105介导,将含有nptⅡ基因的重组表达质粒pBI121-attM转化彩色马蹄莲的芽基盘切片,经G-418筛选,最终从近万块芽基盘切片中获得了4株阳性再生转基因植株。经gus染色和PCR检测证明attM基因已整合到彩色马蹄莲基因组中。为进一步研究和利用attM基因,为防控细菌性软腐病奠定基础,本研究根据已报道的attM基因序列设计引物,从土壤根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中PCR扩增获得attM基因,构建蛋白表达载体pET30a-attM,在大肠杆菌BL21中诱导AHLase蛋白的表达。SDS-PAGE检测发现attM基因能高效表达AttM解酯酶蛋白。利用SDS-PAGE中对应的AttM解酯酶蛋白直接进行成兔免疫,获取其抗体血清,ELISA和Western Blot检测了证明此免疫方法的可行性。