猪细小病毒(porcine parvovirus，PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一。PPV能增强猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)引起的断奶仔猪多系统消瘦综合征，给养猪业造成巨大损失。本研究利用PCR技术扩增出PPV GD株VP2基因序列的一段靶序列进行克隆，构建重组质粒作为标准阳性模板。通过条件优化，以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立：PPV检测的荧光定量PCR方法。应用此方法对PPV在广东省6个规模化猪场仔猪群中的感染情况进行了调查。主要内容及结果如下： 1.PPV GD株的分离根据GenBank中猪细小病毒的序列，设计一对常规PCR引物，对38份流产的猪胎儿组织病料所提DNA进行常规PCR扩增，检测到了10份PPV阳性病料。取其中4份病料样品研磨后，冻融3次，0.22μm的微孔滤膜过滤除菌接种于PK15细胞，连续传代。提取细胞培养物中的DNA做PCR鉴定，获得了广东分离株PPV。 2.标准阳性模板的制备根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计一对引物，用PCR从PPV细胞培养物中扩增出目的基因(98 bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体，经酶切、PCR、测序鉴定，筛选出重组质粒pMD-PP。 3.PPV荧光定量PCR检测方法的建立根据GenBank中的猪细小病毒基因保守序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针。通过条件优化，以定量的lO倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立PPV检测的荧光定量PCR方法。结果表明，FQ-PCR检测法灵敏度可达1.0×10<0>拷贝/μL，线性范围为10<9>～10<0>，达10个数量级；对起始浓度为1.0×10<9>、1.0×10<8>、1.0×10<7>拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为15.23，16.35和19.63；变异系数分别为0.80％、2.20％和1.45％，均小于5％，说明此方法具有良好的准确性和重现性。对非靶模板及空白反应孔无荧光响应，表明本方法具有良好的检测特异性。对阳性组织病料的检测结果表明该法的检测灵敏度高于常规PCR与套式：PCR(nested-PCR，nPCR)。 4.应用荧光定量PCR、常规PCR和套式PCR方法对PPV在广东省6个规模化猪场仔猪群中的感染情况进行了检测，发现广东省规模化猪场已有PPV感染，相比于常规PCR和套式PCR，荧光定量PCR的检测阳性率最高。