新近研究表明长非编码RNA(lncRNA)在调控细胞分化、细胞增殖、细胞侵袭转移等生物学功能中起着重要的作用。许多lncRNA在多种肿瘤中的表达出现异常,可能参与肿瘤的发生发展过程。lncRNA BANCR,SPRY4-IT1在多种肿瘤中表达紊乱参与,但它们在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及可能的生物学功能尚不清楚,需进一步研究。而lncRNA HOXA11-AS目前尚无相关文献报道其与肿瘤发生发展的关系。本文第一部分研究了lncRNA BANCR在NSCLC中的表达,及其对NSCLC细胞生物学功能的影响和分子机制。第二部分研究了lncRNA SPRY4-IT1在NSCLC组织及细胞中的表达水平对NSCLC细胞增殖,凋亡和侵袭转移能力的影响,及SPRY4-IT1异常表达的分子机制。第三部分研究了反义转录的lncRNA HOXA11-AS在胃癌中的表达水平和调控胃癌细胞增殖及侵袭转移功能的分子机制。以上研究提示lncRNA作为新的RNA调控分子在转录及转录后水平调控下游靶基因的转录表达和蛋白翻译等过程,而lncRNA介导的复杂RNA调控网络在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用,为我们研究NSCLC和胃癌发生发展的分子机制提供了新的思路。第一部分长非编码RNA BANCR调控EMT抑制NSCLC细胞侵袭转移的机制研究目的:研究lncRNA BANCR在NSCLC组织及细胞中的表达水平对细胞增殖,凋亡和侵袭转移功能的影响及分子机制。方法:定量PCR检测了BANCR在NSCLC组织中的表达,并分析了其表达水平与病人临床特征的相关性。MTT,克隆形成,流式细胞技术,Tunel染色检测BANCR对细胞增殖,凋亡的影响;划痕,transwell和活体动物实验检测了BANCR对细胞迁移和侵袭转移能力的影响。Western blot,免疫荧光检测了BANCR对下游靶基因的调控。结果:BANCR在NSCLC组织及细胞中表达下调,并与NSCLC病人的预后差密切相关,且BANCR可能受到组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)调控。NSCLC细胞中过表达BANCR能抑制细胞增殖、侵袭转移能力,并诱导细胞凋亡;干扰BANCR的表达则能促进细胞的侵袭转移能力。Western blot及免疫荧光结果显示BANCR可能是通过调控NSCLC细胞的上皮-间质转化(EMT)影响细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:综上所述,本研究提示在NSCLC中lncRNA BANCR作为EMT的调控因子参与NSCLC细胞的侵袭转移过程,并可能作为NSCLC病人预后差的分子标记物。第二部分EZH2抑制长非编码RNA SPRY4-IT1促NSCLC细胞EMT调控细胞侵袭转移的机制研究目的:研究lncRNA SPRY4-IT1在NSCLC组织及细胞中的表达水平对细胞增殖,凋亡和侵袭转移功能的影响及其异常表达的分子机制。方法:定量PCR检测了SPRY4-IT1在NSCLC组织中的表达,并分析了其表达水平与病人临床特征的相关性。ChIP方法检测EZH2对SPRY4-IT1的调控。MTT,克隆形成,流式细胞技术,Tunel染色和皮下成瘤实验检测SPRY4-IT1对细胞增殖,凋亡的影响;划痕,transwell和活体动物实验检测了SPRY4-IT1对细胞迁移和侵袭转移能力的影响。Western blot,免疫荧光检测了SPRY4-IT1对下游靶基因的调控。结果:SPRY4-IT1在NSCLC组织及细胞中表达下调,并与NSCLC病人的预后差密切相关,且SPRY4-IT1可能受到组蛋白甲基化转移酶EZH2的调控。NSCLC细胞中过表达SPRY4-IT1能抑制细胞增殖、侵袭转移能力,并诱导细胞凋亡;干扰SPRY4-IT1的表达则能促进细胞的侵袭转移能力。Western blot及免疫荧光结果显示SPRY4-IT1可能是通过调控NSCLC细胞的上皮-间质转化(EMT)影响细胞的增殖和侵袭转移能力。NSCLC细胞中封闭EZH2的表达同样能抑制细胞增殖和侵袭转移能力,与过表达SPRY4-IT1的结果一致。拯救实验证实SPRY4-IT1是EZH2发挥癌基因的一个重要的下游因子。结论:综上所述,本研究提示在NSCLC中EZH2抑制lncRNA SPRY4-IT1的转录表达,SPRY4-IT1作为EMT的调控因子参与NSCLC细胞的侵袭转移过程,并可能作为NSCLC病人预后差的分子标记物。第三部分长非编码RNA HOXA11-AS调控KLF2、PRSS8影响胃癌细胞增殖和侵袭转移的机制研究目的:研究lncRNA HOXA11-AS在胃癌组织及细胞中的表达水平对细胞增殖,凋亡和侵袭转移功能的影响及其异常表达和调控下游靶基因的分子机制。方法:生物信息学分析胃癌组织中lncRNA HOXA11-AS的表达,定量PCR验证了HOXA11-AS在胃癌组织中的表达水平。ChIP和荧光素酶方法检测E2F1对HOXA11-AS的转录调控。MTT,克隆形成,流式细胞技术,EDU染色,Tunel染色和皮下成瘤实验检测HOXA11-AS对细胞增殖,凋亡的影响;transwell和尾静脉肺转移实验检测了HOXA11-AS对细胞迁移和侵袭转移能力的影响。细胞核质分离实验确定HOXA11-AS的细胞定位。RIP,RNA-seq方法研究HOXA11-AS对下游靶基因的调控。结果:HOXA11-AS在胃癌组织及细胞中表达上调,且胃癌细胞中转录因子E2F1促进HOXA11-AS的转录表达。胃癌细胞中干扰过HOXA11-AS表达抑制细胞增殖、侵袭转移能力,并诱导细胞凋亡;上调HOXA11-AS的表达则能促进细胞的增殖和侵袭能力。RIP结果显示HOXA11-AS在胃癌细胞中绑定募集PRC2,LSD1,DNMT1,WDR5,AGO2和STAU1等RNA结合蛋白。RNA-seq结果显示PRSS8和KLF2可能是HOXA11-AS的下游靶基因。结论:综上所述,本研究提示在胃癌中E2F1促进lncRNA HOXA11-AS的转录表达,HOXA11-AS可能通过募集绑定PRC2/LSD1/DNMT1/STAU1等调控PRSS8和KLF2参与胃癌的发生发展,并可能作为胃癌病人预后差的分子标记物。