打碗花化学成分及其抗糖尿病活性研究

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目前,糖尿病已成为许多国家的常见病和多发病。据统计,全球每年新增3-5%糖尿病患者,我国糖尿病的发病率约为3.21%。而且糖尿病的发病率在全球范围内仍呈上升趋势,其死亡率仅次于心脑血管疾病、癌症,被认为是人类第三大杀手。因此,积极预防和治疗糖尿病已迫在眉睫。  随着人们对糖尿病基础研究的不断深入,已开发研制出多种有效治疗糖尿病的药物。其中,α-葡萄糖苷酶抑制剂治疗糖尿病愈来愈被广大医药工作者所重视,因而,从丰富的天然资源中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂引起了越来越多研究者的关注,深入挖掘治疗糖尿病的中草药资源已成为新药开发的热点。  打碗花(Calystegia hederacea Wall.)为旋花科打碗花属的一年生草本植物,具有多种药理活性。民间流传打碗花是治疗糖尿病的药用植物,而国内外文献未见报道,本论文旨在揭示打碗花中抗糖尿病的活性物质,为研究打碗花的抗糖尿病作用奠定基础。因此,本论文主要对以下几方面进行了研究:  1、打碗花化学成分预试验。通过多种指示剂和显色剂的沉淀反应或颜色反应,初步推断打碗花中可能含有氨基酸、蛋白质、糖及其苷类、有机酸、酚类和鞣质、皂苷、黄酮类、香豆素、生物碱等化学成分。  2、打碗花提取物降血糖作用的初步研究。结果表明:DWHⅠ、DWHⅡ、DWHⅢ均能明显降低四氧嘧啶造模小鼠的血糖含量。其中以DWHⅢ1.0g/kg剂量时降糖效果最好,且与造型组相比具有显著性差异(p<0.01)。  3、打碗花化学成分分离与鉴定。通过溶剂萃取、薄层层析、柱层析、重结晶等分离方法,从打碗花中分离得到6个化合物。经理化常数、化学定性反应和光谱学测定(UV、NMR、IR、X射线衍射),并与文献比较,依次鉴定为β-谷甾醇、莨菪亭、蔗糖和L-天冬氨酸,其中,β-谷甾醇、莨菪亭和L-天冬氨酸为首次从该属植物分离得到。  4、打碗花中莨菪亭含量的测定。首次从打碗花中分离得到莨菪亭,基于莨菪亭的多种活性功能,建立了HPLC法测定打碗花中莨菪亭含量的方法。用该法测定打碗花中莨菪亭含量灵敏准确(平均回收率为99.1%,RSD为0.9%),可为其质量评价提供了一定的参考依据。  5、打碗花中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选。通过体外酶-抑制剂筛选模型的建立,首次对打碗花中α-葡萄糖苷酶抑制剂进行活性追踪,筛选得到几个活性较高的组分。其中,a3的抑制活性最高,IC50仅为0.92mg·mL-1。经HPLC、LC-MS分析,a3主要成分为绿原酸。
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