[目的]　　 通过原代培养的方法培养大鼠小胶质细胞，掌握其培养、分离及鉴定的方法，从而为进一步研究其功能奠定基础。初步阐明Aβ1-42对体外小胶质细胞中TNFαmRNA表达及。TNFα蛋白外分泌量的影响，以期为阿尔茨海默病(AD)的抗炎治疗提供一定的理论依据。　　 [方法]　　 取S-D新生大鼠的大脑皮层进行混合胶质细胞的原代培养，用摇床振摇法分离小胶质细胞，并进行Mac-1免疫细胞化学鉴定。取分离纯化后培养10天左右的细胞，以1×105/孔的浓度接种至六孔板中，稳定24小时后，用含1％的血清的DMEM-F12培养基培养24小时使细胞处于同步化状态。用含Aβ1-42终浓度为0.3umol/L、3umol/L的培养基分别刺激细胞6小时、24小时、48小时。用荧光定量PCR的方法检测各组细胞中TNFα mRNA表达量，并收集细胞培养液进行ELISA检测，并进行统计学分析。　　 [结果]　　 1.原代培养过程动态观察：取材后1～2d，由于大量神经元死亡，细胞较稀疏；随后星形胶质细胞开始增殖，至5～6d，长满培养瓶，而同时小胶质细胞也明显增多，呈亮点状分布于星形胶质细胞的上层；9～12d，小胶质细胞的数量达到高峰。振摇分离2～3天后，细胞呈圆点状；分离后约8～10d后小胶质细胞胞体伸展，呈多形性，周围有光晕。　　 2.小胶质细胞Mac-1染色：免疫细胞化学染色显示Mac-1阳性细胞为棕黄色，呈多形性，对照组不着色。经计数，结果表明细胞的纯度为92％，达到实验要求。　　 3.TNFα mRNA的表达情况：　　 (1)0.3μmol/LAβ组细胞中TNFamRNA的表达量与对照组比较，于6小时开始升高，24小时明显升高(P<0.01)，48小时开始下降。同组内比较，6小时与24小时比较，差异有统计学意义(P<0.01)。　　 (2)3.0μmol/LAβ组细胞中，表达量于6小时开始升高，在24小时明显升高并达到高峰，明显高于同时间点其它组(P<0.01)；在48小时，表达量开始下降，仍高于同时间点其它组(P<0.01)。同组内比较，24小时、48小时分别与6小时相比，差异有统计学意义(P<0.01)　　 4.细胞培养液上清中TNFα浓度的变化　　 (1)3μmol/LAβ组：与对照组比较，在24小时时间点TNFα浓度略升高(P>0.05)。　　 (2)3.0μmol/LAβ组：TNFα浓度在6小时无明显升高；在24小时明显升高并达到高峰，明显高于同时间点其它两组，差异有统计学意义(P<0.01)；在48小时，浓度开始下降，分别与该时间点其它两组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。同组内比较，任两时间点之间比较，差异均有统计学意义(P<0.01)。　　 [结论]　　 1.采用“营养缺失法”，并结合“摇床分离法”能够获得高纯度的小胶质细胞。　　 2.β-淀粉样蛋白1-42能够上调原代小胶质细胞中TNFα mRNA的表达及促进TNFα蛋白的分泌。