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目的 顺铂(Cisplatin)是常用的化疗药物,但肾毒性限制了其临床应用。黄芪多糖(AstragalusPolysaccharides,APS)是中药黄芪中的有效活性成分之一,具有抗炎、抗氧化等作用。本实验通过顺铂诱导小鼠急性肾损伤模型以及人肾近曲小管上皮细胞(HK-2细胞),探讨黄芪多糖的保护作用和机制。方法 1.在注射顺铂小鼠和注射APS+顺铂小鼠中,比较血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾损伤因子(Kim-1)表达差异;ELISA检测肾组织匀浆中肾损伤分子Kim-1、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Ngal)表达差异。2.TUNEL染色检测小鼠肾组织细胞凋亡,免疫组织化学检测3-硝基酪氨酸(3-NT)表达差异,ELISA检测肾组织匀浆中CuZn/Mn-SOD酶活性、总谷胱甘肽过氧化物酶活性,研究APS拮抗氧化损伤和抗凋亡作用。3.在单独顺铂和APS+顺铂处理HK-2细胞中,CCK-8法检测细胞活力差异;TUNEL检测细胞凋亡,观察APS在细胞水平的保护作用;4.DCFH-DA流式细胞术和Mito SOX?Red荧光显微镜检测细胞和线粒体内活性氧(ROS),研究APS抗氧化作用;5.Mito Tracker?观察线粒体形态,Real-Time qPCR分析线粒体fusion-fisson稳态相关蛋白的RNA水平,流式细胞术检测线粒体膜通透性转换孔开放;Westen Blotting检测细胞浆内细胞色素C释放,研究APS对线粒体的保护作用。结果 1.APS可明显降低顺铂导致的小鼠SCr、BUN、Kim-1水平,降低肾小管损伤指数评分和组织Kim-1、Ngal表达,减少肾小管上皮细胞凋亡,保护总SOD酶活力及GSH-PX酶活力,减少氧化应激产物3-NT的产生。2.APS可以明显改善细胞活力,减少HK-2细胞凋亡,可以降低顺铂诱导的细胞内ROS聚集和线粒体内SOX聚集的,减轻氧化应激损伤;减轻顺铂引起的线粒体破碎,保护线粒体形态;维持线粒体fusion-fisson稳态;维持线粒体通透性,减少线粒体细胞色素C释放。结论 黄芪多糖可以保护线粒体的完整性和功能,减轻线粒体内和细胞内的氧化应激损伤,从而减少肾小管上皮细胞凋亡,对顺铂引起的肾损伤,具有保护作用。