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目的:南药“凉粉草”别名仙人草、仙草、冻草、薪草,为唇形科(Labiatae)植物凉粉草MesonachinensisBenth.的干燥全草。已有凉粉草含量测定的文献报道,但存在指标成分单一、缺乏专属性等不足,质量控制方法有待进一步提高。凉粉草的化学成分研究鲜见报道,缺乏特征性强的对照品已成为提高凉粉草质量控制的一个难题。有文献报道凉粉草总多糖含量达43.84%,然而尚未有凉粉草药材中糖类成分含量测定的文献报道。酚酸、黄酮和糖类成分是凉粉草药材的主要成分,测定这些成分的含量则能够有效控制凉粉草药材的质量。因此,为阐明凉粉草的化学成分和控制凉粉草的质量,本文对该药材甲醇提取物的乙酸乙酯部位、正丁醇部位以及水相进行系统化学成分研究,以期丰富其化学成分类型,为后期的质量分析提供对照品;在化学成分系统研究的基础上,构建凉粉草药材HPLC指纹图谱定性鉴别方法,鉴别药材的真伪,与随行对照品进行比较,指认特征色谱峰的化学信息;采用HPLC/HPLC-ELSD测定凉粉草中多指标成分的含量,全面的反映药材的内在质量量量,同时为凉粉草质量标准的制订提供依据。方法:1.综合运用硅胶柱层析、硅胶薄层层析、反相(ODS)、羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20以及大孔树脂AB-8等现代色谱分离技术,对凉粉草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位、水相进行分离纯化,并采用NMR波谱技术对所分离的化合物进行结构鉴定。2.本实验建立了凉粉草药材的HPLC色谱指纹图谱评价方法,采用相似度评价软件确定共有峰和进行相似度分析,对照品进行比对,指认共有峰的化学成分信息;同时运用SPSS 19.0对不同批次药材进行Ward联接聚类分析和最大方差法主成分分析评价该药材的质量。3.采用HPLC测定凉粉草药材中紫草酸、迷迭香酸葡萄糖苷、紫草酸B、迷迭香酸、丹酚酸J和异槲皮苷的含量,并进行质量评价。4.采用用用HPLC-ELSD法对凉粉草药材中的果糖、αa-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、蔗糖和β-D-半乳糖(1→6)-α-L-葡萄糖(1→2)-β-D-果糖进行含量测定。成果:1.共鉴定42个化合物,其中12个黄酮:紫云英苷(LFC-1)、山奈酚-3-0-[6"-O-(反式-对-肉桂酰基)]—β-D-葡萄糖苷(LFC-2)、山奈酚-3-O-ββ-D-吡喃葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(LFC-3)、山奈酚(LFC-4)、山奈酚-3,7-双-O-β-D-吡喃葡萄苷(LFC-5)、山奈酚-7-O-α-L-鼠李糖-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖(LFC-6)、异槲皮苷(LFC-7)、槲皮素-3-0-(6"-O-反式对香豆酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(LFC-8)、木樨草素-3-O-Cβ-D-(6-O-Z-对香豆酰基)-吡喃葡萄糖苷(LFC-9)、槲皮素-3-0-(6"-O-E-咖啡酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(LFC-10)、槲皮素(LFC-11)、芦丁(LFC-12);15个酚酸:迷迭香酸(LFC-13)、迷迭香酸甲酯(LFC-14)、迷迭香酸葡萄糖苷(LFC-15)、迷迭香酸甲酯葡萄糖苷(LFC-16)、丹酚酸A(LFC-17)、9’,9’"-紫草酸B二甲酯(LFC-18)、紫草酸B(LFC-19)、紫草酸甲酯(LFC-20)、紫草酸(LFC-21)、咖啡酸(LFC-22)、咖啡酸葡萄糖苷(LFC-23)、原儿茶酸(LFC-24)、丹参素(LFC-25)、丹酚酸 J(LFC-26)、4-hydroxy-2,6-dimethoxyphenol-1-O-β-D-glucoside(L FC-27);9个糖:果糖(LFC-28)、2-甲基-α-D-呋喃果糖(LFC-29)、2-甲基-β-D-呋喃果糖(LFC-30)、葡萄糖(LFC-31)、1-乙基-β-D-葡萄糖(LFC-32)、2-甲基-β-D-吡喃果糖(LF C-33)、半乳糖(LFC-34)、蔗糖(LFC-35)、β-D-半乳糖(1→6)-α-L-葡萄糖(1→2)-β-D-果糖(LFC-36);3 个萜类:齐墩果酸(LFC-37)、β-胡萝卜苷(LFC-38)、2α,3β，19α,24-tetra-hydroxyolean-12-ene-23,28-dioicacid-23-O-β-glucopyranoside(LFC-39);3 个含氮化合物:3-吲哚甲酸(LFC-40)、尿嘧啶核苷(LFC-41)、腺苷:(LFC-42)。2.建立凉粉草药材的HPLC色谱指纹图谱,体现该药材多成分的特点,鉴别药材的真伪。16批凉粉草药材的相似度在0.766～0.982之间,说明不同产地的药材既有较好的相似性,又有一定的区别,体现在化学成分含量上的差异。根据聚类分析结果筛选出相似度较好的10批药材构建凉粉草的共有模式并确定11个共有峰,与分离得到的化合物进行比较,指认其中的8个特征色谱峰:咖啡酸(1#)、紫草酸(2#)、异槲皮苷(4#)、迷迭香酸葡萄糖苷(5#)、紫云英苷(6#)、紫草酸B(7#)、迷迭香酸(8#)、丹酚酸J(9#)。主成分结果显示第一主成分中紫草酸、异槲皮苷、迷迭香酸葡萄糖苷、紫草酸B、迷迭香酸、丹酚酸J这6个成分对凉粉草药材的分类起着相对比较重要的作用。3.HPLC法测定凉粉草中6个主要成分的含量,其含量范围分别为:0.43～5.17 mg/g(紫草酸)、0.29～1.79 mg/g(迷迭香酸葡萄糖苷)、3.47～22.34 mg/g(紫草酸 B)、1.60～7.35 mg/g(迷迭香酸)、0.36～2.40 mg/g(丹酚酸 J)、0.16～2.56 mg/g(异槲皮苷),平均含量分别为 2.05 mg/g、0.73 mg/g、11.00 mg/g、4.32 mg/g、1.10 mg/g、0.98 mg/g。紫草酸B的平均含量为11.00 mg/g,其含量明显高于其它5个化合物。根据实验结果,故建议各化合物含量限度按平均值的80%计算,紫草酸的含量不低于1.6 mg/g,迷迭香酸葡萄糖苷的含量不低于0.6 mg/g,紫草酸B的含量不低于8.8 mg/g,迷迭香酸的含量不低于3.5 mg/g,丹酚酸J的含量不低于0.9 mg/g,异槲皮苷的含量不低于 0.8 mg/g。4.HPLC-ELSD法测得凉粉草中果糖、a-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、蔗糖和β-D-半乳糖(1→6)-α-L-葡萄糖(1→2)-β-D-果糖的含量分别为:3.600～16.86 mg/g、6.40～18.49 mgg/g、6.45～19.81mg/g、0.92～8.47mg/g、1.85～9.35mg/g,平均含量分别为:10.06mg/g、10.67 mg/g、12.47 mg/g、2.89 mg/g、4.26 mg/g。5 个糖中,化合物β-D-葡萄糖的平均含量最高,其次是a-D-葡萄糖,再次为果糖,而蔗糖、β-D-半乳糖(1→,6)-α-L-葡萄糖(1→2)-ββ-D-果糖这两个成分的平均含量略低,结果表明不同批次的药材中糖类成分含量有一定的差别;同时也表明β-D构型为糖类成分的优势构型。根据实验结果,故建议各化合物含量限度按平均值的80%计算,我们建议果糖的含量不小于8.0 mg/g,a-D-葡萄糖含量不小于8.5 mg/g,β-D-葡萄糖含量不小于10.0 mg/g,蔗糖含量不小于2.3 mg/g,蔗糖含量不小于3.4 mg/g。结论:本实验从凉粉草药材的甲醇提取物中分离出50个化合物,鉴定了42个化合物,其中,12个黄酮,15个酚酸,9个糖,3个萜类,3个含氮化合物,33化合物首次从凉粉草属中分离得到,34个化合物首次从该植物中分离得到。综合所分离得到的化合物,凉粉草主要化学成分类型为黄酮、酚酸和糖类化合物,分离得到的成分大多数是中等或者偏大极性。黄酮类化合物中存在以槲皮素和山奈酚为苷元及其糖上咖啡酸酰化、肉桂酸酰化或对香豆酰基化的黄酮苷化合物,为凉粉草属中首次报道这种酰基化的黄酮化合物;酚酸类化合物由苯丙酸(C6-C3)或安息香酸(C6-C1)的衍生物组成,具有酚羟基或苯烯结构,酚酸上连接一个葡萄糖片段,为首次从凉粉草属植物中分离出来;糖类化合物有常见的单糖如葡萄糖,也有甲基化或者乙基化的单糖如2-甲基-β-D-呋喃果糖等,尚有双糖和三糖。除此之外,还鉴定出3个含氮化合物(尿嘧啶核苷、腺苷、3-吲哚甲酸)。本论文首次从凉粉草中分离出单糖、甲基或乙基化单糖、双糖、三糖、核苷、吲哚类化合物,丰富其化学成分类型;同时构建了凉粉草药材的HPLC指纹图谱分析方法、HPLC以及HPLC-ELSD含量测定方法,为综合评价该药材的质量提供参考资料。