【摘 要】
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近年来,抗生素的泛滥使用对世界各国造成了困扰,耐药菌甚至超级细菌的出现威胁到了人们的健康,因此,寻找抗生素的替代物迫在眉睫,抗菌肽成为候选者之一。抗菌肽（Antimicrobial peptides）是一类具有广谱抗菌活性的小分子多肽,它存在于多种形式的生命体中,还具有调节免疫系统等生物活性,在医药、禽畜生产、食品行业等多个行业都受到广泛的关注。包涵体（Inclusion body,IB）形式为重
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近年来,抗生素的泛滥使用对世界各国造成了困扰,耐药菌甚至超级细菌的出现威胁到了人们的健康,因此,寻找抗生素的替代物迫在眉睫,抗菌肽成为候选者之一。抗菌肽（Antimicrobial peptides）是一类具有广谱抗菌活性的小分子多肽,它存在于多种形式的生命体中,还具有调节免疫系统等生物活性,在医药、禽畜生产、食品行业等多个行业都受到广泛的关注。包涵体（Inclusion body,IB）形式为重组抗菌肽的表达提供了有效途径,其中,融合标签对抗菌肽的表达起着关键作用。本实验根据不同氨基酸的物理化学性质,以大肠杆菌的密码子偏好性对融合标签棕榈酰磷脂转移酶（PagP）的氨基酸序列进行改造,并对此进行了蛋白质结构预测,设计得到了4个融合标签,显著提高了包涵体介导的融合抗菌肽的表达量。本实验尝试了乙酸、乙酸-尿素、乙酸-盐酸胍-尿素-Tween等试剂的协同作用,初步建立了包涵体的溶解方法。本实验还对蛋白酶TEV进行了设计改造,在原有TEV的C-末端增加了9个串联的精氨酸,并与未改造的蛋白酶进行对比,结果显示,改造后的蛋白酶显著提高了在酸性或碱性条件上的酶切活性。此外,本实验利用ACP介导蛋白酶TEV成功实现其固定化,为利用固定化蛋白酶TEV切割融合蛋白,建立重组抗菌肽的便捷纯化方法打下了基础。
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