两株淀粉酶产生菌的分类鉴定、酶学性质分析及一株果胶酶产生菌的分类鉴定

来源 :新疆大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuweijie2009
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本论文工作是从嗜碱微生物的应用出发,来探索有工业应用前景的嗜碱菌。通过细胞形态和习性、生理生化实验、核酸水平(16S rDNA,G+C mol%含量)以及细胞壁脂肪酸组分含量分析对新分离到的三株细菌进行鉴定,并对其所产碱性淀粉酶和碱性果胶酶每学性质进行分析。(1)生理生化实验结果表明,XJU-3和XJU-4其革兰氏染色阳性、具芽孢、降解淀粉、接触酶氧化酶等特性均与B. flexus相似,差别存在与尿素水解、木糖、乳糖的利用和pH耐受性这三方面。16S rDNA序列分析表明,两个菌株与Bacillus flexus的16S rDNA序列均具有99%的相似性。由此,初步推测两个分离菌隶属于Bacillus flexus。XJU-3和XJU-4菌株的(G+C)mol%含量分别是39.13%和38.35%,与16S rDNA序列比对最近源种Bacillus flexus的(G+C) mol%含量一致。脂肪酸含量分析表明XJU-3和XJU-4与B .flexus种内的菌株差异较大。这也许是由于该菌株长期对特殊环境的适应,已稳定进化为B .flexus中的新菌株。基于以上结果,我们将新分离到的两株细菌鉴定为Bacillus flexus XJU-3(EF157300,CCTCC AB 207167)和Bacillus flexus XJU-4(EF157301,CCTCC AB 207168)。(2)通过兰值法,初步测定了由新分离菌株XJU-3和XJU-8所产生的碱性淀粉酶的酶活。结果表明,由B.flexus XJU-3和B.flexus XJU-4产生的碱性淀粉酶均具有良好的pH耐受性和稳定性(前者pH7.5-11,最适pH10;后者pH8-13,最适pH11;温浴1 h后,残余酶活高于80%)。B.flexus XJU-3和B.flexus XJU-4产生的碱性淀粉酶在中温均具有良好的耐受性和稳定性(前者T=30-60℃,最适温度为40℃;后者T=30-55℃,最适温度为50℃)。多数金属离子可促进XJU-4碱性淀粉酶的酶活。(3)从新疆石河子市一处工业污水(pH11.0)中分离到一株碱性果胶酶产生菌,编号XJU-8。应用生理生化试验,脂肪酸含量,16S rDNA序列以及G+C mol%含量等方法对菌株进行鉴定。XJU-8可在pH5.0~13.0的LB培养基上生长,最适生长温度37℃。16S rDNA序列构建的系统进化树表明XJU-8与Bacillus claussi类聚在一起,且序列同源性为99%。XJU-8与B.claussi GMBAE 42在氧化酶,柠檬酸盐利用和水解Tween40、Tween80上有差异,且XJU-8有宽范围pH耐受性,被认为是B.claussi的一个新菌株。XJU-8的(G+C)mol%含量是42.13%,与16SrDNA序列比对最近源种Bacillus clausii的(G+C) mol%含量一致。基于以上结果,我们将新分离到的细菌鉴定为Bacillus clausii XJU-8(EF643510,CCTCC AB 207169)。(4)通过DNS法,初步测定了新分离细菌XJU-8所产碱性果胶酶的酶学性质,菌株XJU-8分泌的碱性果胶酶最适pH是10,最适温度是50℃。50℃,pH9-12温育60分钟保持原来酶活80%以上, Ca2+能够提高酶活,Zn2+、Fe3+、Co2+、Cu2+、Hg2+会抑制酶活。实验结果表明,由B.claussi XJU-8产生的碱性果胶酶在碱性条件下有较高活性和稳定性,工业应用潜能巨大。
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