疟疾是当今世界三大传染性疾病之一。根据WHO最新统计数据显示,2009年全球2.25亿人感染疟疾,有78.1万人因其死亡,而且大多数是5岁以下儿童和孕妇[1]。在所有疟原虫中,恶性疟是危害最严重、致死率最高的一种。在疟疾控制的过程中不断出现恶性疟原虫及按蚊抗药性,这就加剧了人们对于预防性和治疗性疟疾疫苗的需求。由于疟原虫生活周期复杂,抗原具有阶段特异性、虫株差异性和高度变异性等特点,目前针对单个抗原或表位的疫苗在相关实验中未取得较好的效果,因此多表位嵌合疫苗就成为研究抗疟疫苗的热点[2]。本课题组前期工作中,我们利用表位随机重组技术构建了多表位基因库[3],并用库免疫血清筛选出免疫原性最佳、稳定性最好的人工随机组合抗原M.RCAg-1和M.RCAg-3.用弗氏佐剂在小鼠和新西兰兔动物模型中证实二者具有较强的免疫原性并可在体外抑制恶性疟原虫的生长(Growth Inhibi tion Assay.GIA).换用佐剂Montanide ISA51(Seppic,France)免疫恒河猴后发现局部刺激性较大。因此,本研究目的是选择新的抗原佐剂使M.RCAg-1和M.RCAg-3能顺利用于临床观察.本研究在前期工作的基础上,根据第二代多表位嵌合抗原疫苗M.RCAg-3的理化性质,利用阴离子交换柱、疏水作用层析柱和分子筛,摸索总结出了第二代多表位嵌合抗原疫苗M.RCAg-3的纯化步骤。并且选用了有临床应用前景或正在临床应用的佐剂(CpG.Al.AD.ADL)与M.RCAg-1和M.RCAg-3配伍,以提高其免疫原性。还用纳米粒包裹蛋白或蛋白加佐剂来免疫实验动物,以探索新的抗原递呈途径,增加抗原的免疫原性。通过对不同组别免疫效果的评价来分析其相应的佐剂效应。最终选择ADL和AD分别与M.RCAg-1和M.RCAg-3配伍免疫大白兔,验证其抗体的体外保护效果。主要取得以下进展：1.摸索出纯化第二代多表位嵌合抗原疫苗M.RCAg-3的纯化步骤,最终纯化结果可达到98.8%。2.筛选与M.RCAg-1和M.RCAg-3相配伍的佐剂。佐剂ADL和AD分别能显著增强M.RCAg-1和M.RCAg-3免疫反应。而佐剂CpG和CpG&A1增强抗原免疫反应的能力相对较弱。初步确定用纳米包裹递呈蛋白的方法不适合M.RCAg-1和M.RCAg-3。3. M. RCAg-1(小试)、M.RCAg-1(中试)和M.RCAg-3分别与佐剂ADL AD1和AD配伍免疫大白兔后,总IgG和特异性IgG的GIA水平接近WHO规定的阳性对照抗体的体外生长抑制试验(GIA)水平。