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目的:探索UBE2I(Ubiquitin-ConjugatingEnzymeE2I,泛素结合酶E2I)表达对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响及探讨槲皮素通过下调HPVE6/E7抑制宫颈癌细胞中UBE2I表达对宫颈癌细胞侵袭、迁移的作用机制。
方法:用WesternBlot和RealTime-PCR分别检测正常宫颈细胞(HCE、H8)、宫颈癌细胞(Siha、Hela和C33A)及宫颈临床标本中UBE2I蛋白及mRNA表达水平。免疫组化方法分析正常宫颈及宫颈癌组织中UBE2I的表达及其与宫颈癌临床病理特征的关系。用UBE2I干扰及过表达质粒分别转染宫颈癌细胞,Transwell实验检测细胞转染前后侵袭、迁移能力的变化,WesternBlot检测侵袭、迁移相关蛋白MMP2、MMP9表达变化。用槲皮素处理宫颈癌细胞,WesternBlot检测处理前后UBE2I、SUMO1、SUMO2+3及HPVE6/E7表达变化。干扰Siha、Hela细胞中HPVE6/E7后检测UBE2I蛋白表达及干扰UBE2I表达后检测HPVE6/E7蛋白表达,验证HPVE6/E7与UBE2I之间的相互作用。Transwell实验检测不同实验分组(空白组、槲皮素处理组、槲皮素+pcDNA3.1组、槲皮素+pcDNA3.1-UBE2I组)中Siha、Hela细胞侵袭、迁移能力变化,WesternBlot检测不同实验分组中侵袭、迁移相关蛋白MMP2、MMP9表达。
结果:与正常宫颈细胞相比,宫颈癌细胞中UBE2I蛋白及mRNA表达水平明显上升,宫颈癌组织中UBE2I蛋白表达也较宫颈癌旁组织显著上升(p<0.001);免疫组化结果显示,UBE2I表达与患者年龄、病理分级、有无淋巴结转移无明显相关性(p>0.05),除Ⅱ期及Ⅲ期宫颈癌外,随着临床病理分期的上升,UBE2I表达水平随之上升,差异具有统计学意义(p<0.05)。下调UBE2I表达,宫颈癌细胞侵袭、迁移能力减弱,MMP2、MMP9表达水平下降;上调UBE2I表达,宫颈癌细胞侵袭、迁移能力增强,MMP2、MMP9表达水平上升,差异均具有统计学意义(p<0.01)。槲皮素处理Siha、Hela及C33A细胞后,Siha、Hela细胞中UBE2I、SUMO1、SUMO2+3水平明显降低,C33A细胞中UBE2I水平无明显变化,Siha、Hela细胞中HPVE6/E7蛋白表达下降(p<0.001)。干扰HPVE6/E7蛋白表达后,UBE2I表达明显下降,干扰UBE2I蛋白表达后,HPVE6/E7蛋白表达下调,差异均具有统计学意义(p<0.05)。槲皮素处理组中,Siha、Hela细胞侵袭、迁移能力减弱,槲皮素+pcDNA3.1-UBE2I组较单用槲皮素处理组相比,侵袭、迁移能力增强,MMP2、MMP9表达水平也更高,差异具有统计学意义(p<0.001)。
结论:UBE2I表达与宫颈癌侵袭、迁移呈正相关,槲皮素能够通过下调宫颈癌细胞中HPVE6/E7水平抑制UBE2I蛋白表达,从而抑制宫颈癌细胞的侵袭、迁移。
方法:用WesternBlot和RealTime-PCR分别检测正常宫颈细胞(HCE、H8)、宫颈癌细胞(Siha、Hela和C33A)及宫颈临床标本中UBE2I蛋白及mRNA表达水平。免疫组化方法分析正常宫颈及宫颈癌组织中UBE2I的表达及其与宫颈癌临床病理特征的关系。用UBE2I干扰及过表达质粒分别转染宫颈癌细胞,Transwell实验检测细胞转染前后侵袭、迁移能力的变化,WesternBlot检测侵袭、迁移相关蛋白MMP2、MMP9表达变化。用槲皮素处理宫颈癌细胞,WesternBlot检测处理前后UBE2I、SUMO1、SUMO2+3及HPVE6/E7表达变化。干扰Siha、Hela细胞中HPVE6/E7后检测UBE2I蛋白表达及干扰UBE2I表达后检测HPVE6/E7蛋白表达,验证HPVE6/E7与UBE2I之间的相互作用。Transwell实验检测不同实验分组(空白组、槲皮素处理组、槲皮素+pcDNA3.1组、槲皮素+pcDNA3.1-UBE2I组)中Siha、Hela细胞侵袭、迁移能力变化,WesternBlot检测不同实验分组中侵袭、迁移相关蛋白MMP2、MMP9表达。
结果:与正常宫颈细胞相比,宫颈癌细胞中UBE2I蛋白及mRNA表达水平明显上升,宫颈癌组织中UBE2I蛋白表达也较宫颈癌旁组织显著上升(p<0.001);免疫组化结果显示,UBE2I表达与患者年龄、病理分级、有无淋巴结转移无明显相关性(p>0.05),除Ⅱ期及Ⅲ期宫颈癌外,随着临床病理分期的上升,UBE2I表达水平随之上升,差异具有统计学意义(p<0.05)。下调UBE2I表达,宫颈癌细胞侵袭、迁移能力减弱,MMP2、MMP9表达水平下降;上调UBE2I表达,宫颈癌细胞侵袭、迁移能力增强,MMP2、MMP9表达水平上升,差异均具有统计学意义(p<0.01)。槲皮素处理Siha、Hela及C33A细胞后,Siha、Hela细胞中UBE2I、SUMO1、SUMO2+3水平明显降低,C33A细胞中UBE2I水平无明显变化,Siha、Hela细胞中HPVE6/E7蛋白表达下降(p<0.001)。干扰HPVE6/E7蛋白表达后,UBE2I表达明显下降,干扰UBE2I蛋白表达后,HPVE6/E7蛋白表达下调,差异均具有统计学意义(p<0.05)。槲皮素处理组中,Siha、Hela细胞侵袭、迁移能力减弱,槲皮素+pcDNA3.1-UBE2I组较单用槲皮素处理组相比,侵袭、迁移能力增强,MMP2、MMP9表达水平也更高,差异具有统计学意义(p<0.001)。
结论:UBE2I表达与宫颈癌侵袭、迁移呈正相关,槲皮素能够通过下调宫颈癌细胞中HPVE6/E7水平抑制UBE2I蛋白表达,从而抑制宫颈癌细胞的侵袭、迁移。