论文部分内容阅读
黄瓜花叶病毒属于雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属,能够侵染包括单子叶和双子叶在内的85个科365个属的作物,是世界上拥有最广泛寄主类型的病毒之一。本文通过对前期工作中酵母双杂交筛库获得的宿主因子热休克蛋白(Heatshockprotein)Hsp70进行以下研究。主要结果如下:1.BiFC分析CMV复制酶蛋白1a与Hsp70植物细胞中互作CMV复制酶1a与黄色荧光蛋白YFP的N端融合的载体pCB301-LS1a-nYFP,NbHsp70与YFP的C端融合的载体pCB301-NbHsp70-cYFP,两者共浸润注射于本氏烟,激光共聚焦显微镜观察到寄主细胞中产生黄色荧光,并且黄色荧光与红色的液泡定位marker重合,这表明Hsp70与CMV复制酶1a在寄主细胞中存在相互作用。2.复制酶蛋白1a与Hsp70共定位通过荧光蛋白标记液泡膜和Hsp70研究CMV复制酶1a与Hsp70蛋白的共定位情况。pCB301-Egfp与pCB301-1a共浸润接种结果表明绿色荧光蛋白GFP标记的Hsp70主要是细胞质定位,当复制酶1a存在时,Hsp70被1a招募到液泡膜上。3.本氏烟中过表达Hsp70含量对CMV侵染的影响利用瞬时表达载体pCAMBIA在本氏烟中过表达Hsp70,研究Hsp70含量增加对CMV侵染寄主植物的影响。病毒1a2aR3、R1R2R3-Egfp和R1R2R3侵染过表达的Hsp70的寄主植株,病毒基因组RNA与外壳蛋白的含量均比对照高。4.本氏烟中降低Hsp70含量对CMV侵染的影响利用病毒TRV载体下调Hsp70mRNA含量以及化学试剂quercetin处理抑制Hsp70mRNA翻译,分析本氏烟中Hsp70含量减少对CMV基因组和蛋白积累量的影响。Northernblot和Westernblot结果表明,在TRV-NbHsp70与quercetin处理的本氏烟中,病毒基因组和蛋白含量同对照组相比CMV积累量明显减少。