论文部分内容阅读
目的在前期的研究中，我们发现慢性髓细胞白血病（CML）中β-arrestin1表达增强，且敲除CML K562细胞中的β-arrestin1可抑制CML细胞增殖。本研究进一步从全基因组水平探讨β-arrestin1调控CML增殖过程中的表观遗传机制，为寻找CML的分子靶点及机制提供新的理论依据。方法1.在CML K562细胞和患者骨髓单个核细胞中，分别感染对照质粒（Fugw）和敲除β-arrestin1慢病毒体系(siβ1)，采用Q-PCR、MSP和CHIP技术检测肿瘤相关基因（P15、P16、HOX-a9和PTEN）的甲基化和乙酰化修饰与基因表达的改变。2.分别采用甲基化芯片（MDIP-chip）和启动子芯片(CHIP-DSL)，从全基因组水平分析β-arrestin1调控K562细胞表观遗传修饰改变。3.检测在β-arrestin1调控下，CML K562细胞的特征Bcr/Abl融合基因的甲基化、乙酰化和表达改变。结果1.与对照组相比，CML K562细胞中敲除β-arrestin1后，抑癌基因P15、P16和Pten发生低甲基化，超乙酰化，表达水平上调；而癌基因HOX-a9的甲基化水平升高，乙酰化水平降低，表达水平下调。2. MDIP-chip甲基化芯片结果显示CML K562细胞β-arrestin1敲除后，全基因组整体甲基化水平升高，多数基因发生了超甲基化。启动子区CpG岛甲基化修饰差异易发生在1、4、13、14、19号和X染色体。3. CHIP-DSL启动子芯片结果显示β-arrestin1调节CML K562细胞1316个与组蛋白H4结合的基因乙酰化，这些乙酰化修饰改变对应有CpG岛及转录因子（TF）改变。发生乙酰化修饰的基因与MAPK信号通路的激活有关。甲基化和乙酰化芯片联合分析发现，CML K562细胞β-arrestin1敲除后，细胞结构相关基因的甲基化及乙酰化修饰最易发生改变。4. CML K562细胞β-arrestin1敲除后，其标志Bcr/Abl融合基因的甲基化水平升高，乙酰化水平降低，表达下调。结论β-arrestin1在CML中从全基因组水平调控基因的甲基化和乙酰化，促进CML增殖，特别影响其标志融合基因Bcr/Abl的表观遗传学变化，寻找到β-arrestin1调控CML增殖的表观遗传机制与分子靶点与依据。