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研究背景脑梗死是脑血管病中最常见的疾病及主要致残原因之一,目前除超早期溶栓外尚缺乏有效治疗手段。目前治疗脑梗死的策略主要分为两个:再灌注和神经保护。临床溶栓治疗时间窗只有3-4.5h,且有颅内出血风险,极大的限制了其在临床上的应用,因此,尽早将“再灌注”与“神经保护”相结合才是最佳的治疗方法。已有研究表明脑梗死后自噬过度激活可导致细胞死亡,然而其自噬过度激活机制目前仍不清楚,有待进一步阐明。PI3K/Akt/m TOR信号通路是调节细胞增殖、生长、分化、生存的重要通路,同时又是调节自噬的上游通路。既往研究发现脑梗死后伴自噬上游信号通路PI3K/Akt的抑制,而丹参酮IIA可激活PI3K/Akt,但丹参酮IIA能否因此而抑制其下游自噬尚需进一步研究。所以基于PI3K/Akt/m TOR信号通路探讨脑梗死后自噬过度激活机制及丹参酮IIA对脑梗死后自噬的调控机制,可望为脑梗死临床治疗提供实验依据和新思路,为中医药防治脑梗死提供新方法。目的基于PI3K/Akt/m TOR信号通路探讨脑梗死后自噬过度激活机制及丹参酮IIA对脑梗死后自噬的调控机制。方法首先进行鼠海马细胞株的培养,进而构建鼠海马神经细胞OGD模型。观察普通培养以及缺氧缺糖培养后细胞的增殖变化,研究脑梗塞后对细胞的增殖影响;使用不同浓度的丹参酮IIA处理OGD模型中的神经细胞,研究丹参酮IIA对于细胞的神经保护作用(包括细胞增殖,氧化损伤,线粒体膜通透性,自噬作用);基于PI3K/Akt/m TOR通路后使用不同浓度丹参酮IIA处理OGD中的细胞,研究基于该通路的神经保护作用。结果1:与普通培养比较后,OGD6/R6模型中细胞有50%以上死亡,但丹参酮IIA处理该细胞后有显著抑制细胞死亡,表明丹参酮IIA有抑制细胞死亡,保护细胞的作用;2:(1)丹参酮IIA可以促进神经细胞增殖发挥神经保护作用;(2)用CM-H2DCFDA标记细胞内氧化应激过程(绿色荧光)显示丹参酮IIA可以抑制细胞活性氧产生发挥神经保护作用;(3)活性氧的产生会损伤线粒体膜以及影响膜电位的改变,用JC-1标记膜电位改变(静息电位为红色、绿色为动作电位)显示丹参酮IIA可以抑制线粒体膜电位的改变产生神经保护作用;(4)丹参酮IIA可以有效减少自噬蛋白LC3II的产生,丹参酮IIA通过增加上游P85、Akt、m TOR来抑制自噬蛋白的表保达发挥神经护作用;3:(1)丹参酮IIA可以促进神经细胞增殖发挥神经保护作用,但使用m TOR si RNAs、Akt si RNAs、LY294002(PI3K抑制剂)处理HT-22神经细胞后,丹参酮IIA未表现出相关神经保护作用(2)丹参酮IIA可以抑制活性氧产生发挥神经保护作用,但使用m TOR si RNAs、Akt si RNAs、LY294002(PI3K抑制剂)处理HT-22神经细胞后,丹参酮IIA未表现出相关神经保护作用;(3)丹参酮IIA可以稳定线粒体膜电位稳定发挥神经保护作用,但使用m TOR si RNAs、Akt si RNAs、LY294002(PI3K抑制剂)处理HT-22神经细胞后,丹参酮IIA未表现出相关神经保护作用;(4)丹参酮IIA可以有效减少自噬蛋白LC3II的产生,但使用m TOR si RNAs、Akt si RNAs、LY294002(PI3K抑制剂)处理HT-22神经细胞后,丹参酮IIA未有减少LC3II的表达;丹参酮IIA可以激活pp85,p-akt and p-m TOR,减少LC3II的表达发挥神经保护作用。结论在细胞水平上,丹参酮IIA可通过激活PI3K/Akt/m TOR信号通路中的上游环节,并因此抑制其下游自噬从而发挥神经保护作用。