芒果炭疽病是一个分布非常广泛地真菌性病害,主要由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioiides(Penz.))引起。由于该病原菌通常潜伏在幼果上,故在成熟的果实上常诱发采后病害。目前,生产上防治芒果炭疽病主要采取田间与采后使用化学杀菌剂。由于化学杀菌剂破坏生态环境以及造成病原菌的抗药性等问题,越来越多的研究人员开始寻求探索新的控制果实病害的方法。硼普遍存在于土壤中,是植物不能缺乏的微量元素。因此,硼酸盐作为土壤肥料,能有效提高作物品质和产量。同时,硼酸盐具有杀菌作用,因而被作为一种新型的抗菌剂用来控制果实的采后病害具有非常大的潜力。尽管利用硼酸盐防治芒果采后炭疽病已有报道,但利用蛋白质组学技术研究硼酸盐对芒果胶孢炭疽病的抑制机理却鲜有报道。本研究是在比较蛋白质组学的基础上,利用双向电泳技术(2-DE)和基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF-MS)技术研究四硼酸钾对芒果炭疽菌胞内蛋白的影响。并采用荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR)探究其转录和翻译水平上的相关性。首先通过双向电泳获得不同四硼酸钾浓度(OmM,5mM和7.5mM)分别处理芒果炭疽菌36h,48h后的差异蛋白质图谱,再利用MALDI-TOF-TOF质谱技术,对差异表达蛋白进行鉴定分析。由此推测出一个关于四硼酸钾对芒果炭疽菌胞内蛋白影响的系统代谢图,总结出可能的抑制机理。然后从系统代谢图中选择12个关键蛋白点,分析其对应的基因表达量变化。研究结果如下:1、采用不同浓度四硼酸钾(OmM、2.5mM、5mM、7.5mM和10mM)处理芒果炭疽菌,测定菌落大小。从中选取浓度为5mM和7.5mM的四硼酸钾处理芒果炭疽菌,用于蛋白提取,双向电泳实验。2、通过双向凝胶电泳,PDQuest(Ver8.0,Bio-Rad)软件共检测到约900个蛋白点,并分析得到145个差异表达蛋白点。通过MALDI-TOF-TOF质谱分析,有77个蛋白点被成功鉴定。3、通过对77个差异蛋白点的表达分析,有31个蛋白点差异表达显著上调,28个蛋白点差异表达显著下调,18个蛋白点中每个蛋白差异表达都不单一,既有上调表达,也有下调表达。4、对77个差异蛋白点进行功能分析可以分为12类。它们分别是:能量代谢(12.6%)、氧化还原平衡(19.5%),信号传导(5.8%),细胞防卫(1.2%),蛋白水解(9.2%),蛋白合成(18.4%),蛋白的折叠与装配(6.9%),碳水化合物代谢(3.4%),氨基酸代谢(6.9%),核酸代谢(2.3%),细胞进程(8.0%)和功能未知蛋白(5.8%)。在36h时,差异蛋白点的功能分类为:能量代谢(13.5%)、氧化还原平衡(18.9%),信号传导(6.8%),细胞防卫(1.4%),蛋白水解(10.8%),蛋白合成(21.6%),蛋白的折叠与装配(6.8%),碳水化合物代谢(1.4%),氨基酸代谢(8.1%),细胞进程(6.8%)和功能未知蛋白(4.0%)。在48h时,差异蛋白点的功能分类为:能量代谢(14.1%)、氧化还原平衡(17.2%),信号传导(3.1%),细胞防卫(1.6%),蛋白水解(7.8%),蛋白合成(18.8%),蛋白的折叠与装配(7.8%),碳水化合物代谢(4.7%),氨基酸代谢(4.7%),核酸代谢(3.1%),细胞进程(10.9%)和功能未知蛋白(6.2%)。以上三种分类中,能量代谢、氧化还原平衡和蛋白合成所占比例较大。5、在四硼酸钾的作用下,芒果炭疽菌胞内能量代谢加强;氧化物生成作用增强,过氧化物的清除能力减弱;信号转导和蛋白水解作用减弱;蛋白合成作用、蛋白质的折叠与装配作用增强;氨基酸代谢,核酸代谢增强。此外,四硼酸钾对碳水化合物代谢、细胞进程和细胞防卫作用均产生影响。6、从系统代谢图中选取12个关键差异蛋白进行RT-qPCR鉴定,发现差异蛋白表达与其相对应的基因表达有一定的相关性,但也有个别不一致的情况。因此,在进行蛋白水平测定的同时,从转录水平进行检测是有必要的。