论文部分内容阅读
本文从以下几方面进行论述： 第一节:CNP在大鼠各组织及附睾中的分布 目的：①检测大鼠各脏器中CNP及其受体NPR-B的表达.②检测大鼠附睾头体尾部CNP及其受体NPR-B的表达.③出生后不同时间段,CNP及其受体NPR-B在大鼠附睾的表达.④检测大鼠附睾液中CNP、cGMP的蛋白浓度. 方法：①运用荧光定量PCR法检测CNP和NPR-B在大鼠心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、睾丸、前列腺、精囊腺、附睾等组织的表达量差异.②运用荧光定量PCR、免疫组化、western blot检测附睾头体尾部的CNP、NPR-B的表达量差异.③取出生后不同周龄的大鼠附睾组织,用荧光定量PCR检测CNP和NPR-B的表达趋势.④运用Elisa检测大鼠附睾液中CNP、cGMP的蛋白浓度. 结果：①CNP和NPR-B mRNA在大鼠各组织器官中均有表达,其中CNP在精囊腺中表达最高,其次在前列腺和附睾中也大量表达,而NPR-B在附睾中表达最高,在前列腺和精囊腺中表达次之.②CNP和NPR-B在附睾组织中均有表达,其中在附睾头部表达量最大,体部次之,尾部最少.③CNP和NPR-B在大鼠刚出生时及出生后第五周表达量最大.④CNP,cGMP在附睾头部液体中表达量最大. 结论：CNP及其受体NPR-B在大鼠附睾、前列腺、精囊腺中大量表达,在附睾中主要表达于头部,且CNP和cGMP在头部附睾液中表达多,CNP和NPR-B在大鼠刚出生时以及出生后第五周表达量最高. 第二节:CNP对附睾精子成熟的影响 目的：①探讨CNP及其受体NPR-B是否受大鼠体内雄激素含量的影响.②检测NPR-B在大鼠附睾头体尾部精子中的表达.③体外孵育CNP对大鼠附睾头体尾中精子活力的影响. 方法：①将成熟期(10-12w)SD大鼠阉割后,分为9组(每组4只),前五组分别在被阉割后第0,1,3,5,7天后处死.后四组在被阉割后10天注射睾酮(3mg/Kg/d).在开始注射睾酮之后1,3,5,7天处死,每组老鼠取附睾组织提RNA做荧光定量PCR,并采集血清用Elisa检测血清中的睾酮含量.②运用免疫荧光检测NPR-B在大鼠精子中的表达.③10-7mol/LCNP体外孵育附睾头体尾精子,分别在0,2,4,6,8h检测精子活力. 结果：①与第0天相比,大鼠阉割后,血清中睾酮含量明显下降,CNP和NPR-B的表达量也随之下降;在补充睾酮以后,CNP和NPR-B的表达量亦随之上升.②NPR-B在附睾头体尾精子中均有表达,主要表达与头部和尾部中段.③体外CNP孵育可以增加附睾精子活力. 结论：大鼠附睾中的CNP及其受体NPR-B很可能是在睾丸分泌的睾酮调控下合成分泌的,对雄激素有一定的依赖性.大鼠附睾精子中均表达有CNP的特异性受体NPR-B,CNP可以在体外增加附睾精子的活力.